制备外周血细胞形态报告单涂片的外周血细胞形态报告单悬液样品浓度过小制片前需要做何预处理？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2023-10-11 05:10 标签： 外周血细胞形态报告单
原代悬浮细胞吉姆萨染色法涂片法：1. 用含有5%—10%血清的等渗液将培养的细胞调制成密度为106个/ml的细胞悬液；2. 将1滴细胞悬液滴于一张载玻片的一端，用另一块干净的载玻片，按照血液涂片法将细胞铺展于载玻片上；3. 载玻片在空气中干燥后，再用甲醇固定；4. 对涂有细胞的载玻片进行染色；5. 注意，为避免细胞皱缩应尽快使涂有细胞的载玻片干燥，可摇动载玻片或用吹风机的冷风迅速吹干；6. 用甲醇固定，吉姆萨染色；离心法：1. 需使用离心涂片机将细胞悬液的细胞直接离心沉淀在载玻片上，使细胞的离心沉淀和涂片同时进行；2. 制备细胞悬液，细胞悬液中用含有少量蛋白质，并将细胞浓度调至106个/ml；3. 将滤纸片孔对准出孔，然后插入机头凹槽内，用弹簧片顶紧，使滤纸片夹于标本室的出孔与载玻片之间；4. 离心标本必须对称放置，保持平衡。然后吸取细胞悬液0.1—0.2ml迅速滴入标本室入口，以1000r/min离心5min；5. 离心完毕后自动关机。取出载玻片在空气中干燥后；6. 用甲醇固定，吉姆萨染色；真空过滤法：1. 用含有10%血清的培养液将培养物调制成浓度为106个/ml的细胞悬液；2. 取5—10ml细胞悬液，用直径为25mm、孔径为0.5μm的Nucleopore多孔；3. 当过滤悬液还剩余2ml左右时，轻轻加入110ml平衡盐溶液继续过滤，到剩余2ml时，再加入10ml平衡盐溶液，继续过滤。如此再重复一次。此步骤中平衡盐溶液有漂洗细胞的作用，既能保证细胞充分、均匀地过滤，又为随后的甲醇固定作好准；4. 然后加10ml甲醇到平衡盐溶液中，一直重复到过滤出的液体是纯甲醇为止；5. 空气中干燥，待甲醇完全挥发后，进行吉姆萨染色；染液制备：1. 称取0.5g吉姆萨粉和22ml甘油；2. 取少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合，研磨至无颗粒；3. 将剩余的甘油倒入研钵，于56℃保温2h；4. 加入33ml纯甲醇混匀，即为吉姆萨母液，将其保存于棕色试剂瓶内；5. 取9份pH6.80—7.38的Sorensen缓冲液和1份吉姆萨母液混合即得染色液；7. 按2ml/cm2的比例滴加吉姆萨染液，覆盖细胞层，染色2min；8. 移除染液，用自来水冲洗掉粉红色背景后，再用去离子水冲洗细胞；9. 用显微镜观察单层潮湿细胞。若细胞已干，可重新使细胞潮湿后再观察；结果：细胞核被染成紫红色或紫蓝色，而细胞质则被染成浅红色；注意事项：1. 染液宜现用现配，旧染液染色效果不佳。染液保存时间不宜超过48h；2.
吉姆萨对pH极敏感，因此，缓冲液pH要准确，否则染色效果不佳。如用染色缸染色时，随染色时间的延长，在染液表面常形成一层氧化膜（发亮）易附着在玻片上形成污秽，且不易除掉。因此在用染色缸染色，尤其用的不是现配者时，染色前应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。染色完毕，应把标本浸入水中漂洗染液；

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免疫学实验指导生命科学与工程学院生物工程、生物技术、动物医学专业用冯玉萍[分组]：4人/组，实验用动物、器材以每组需要量设计[班级] 2006生物工程、生物技术[学生人数]：65人/58人。分16组/15组[时间] 2008年3月—2008年7月两周一次4学时。目录实验一、免疫学实验动物的一般操作实验二、实验动物免疫器官、免疫细胞观察实验三、实验动物的采血方法、动物血清及红细胞的制备方法实验四、淋巴细胞分离与E玫瑰花环形成试验实验五、IgG的分离和纯化实验六、玻片凝集试验(ABO血型鉴定)实验七、环状沉淀试验实验八、琼脂扩散试验（单向）实验九、巨噬细胞吞噬功能试验实验十、白细胞吞噬试验上一页下一页

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