【别名】黄血盐钠；黄钠

【物化性质】柠檬黄色单斜晶系棱形或针状结晶。相对密度1.4580溶于水，不溶于醇。在空气中易风化，在50～60℃的温度下，晶体会很快失去结晶水。在更高的温度下进行干燥，则成坚硬的块状无水盐。在常温的稀酸中不分解，但在煮沸的浓酸中生成游离的氢氰酸。与作用，生成乳白色的亚铁氰化银沉淀。与作用生成白色的亚铁氰化亚铁沉淀，继而氧化生成普鲁士蓝亚铁氰化铁。在氧化剂的影响下，氧化为。强烈灼烧时完全分解放出氮气，并生成和碳化铁。

【质量标准】国家标准《食品添加剂亚铁氰化钠》GB

【用途】是制造蓝色颜料的原料，用于油漆、涂料和油墨。印染工业中用于制蓝色晒图纸。医药工业用于医药品生产过程中的去铁剂。亦用于钢铁渗碳、鞣革、金属表面防腐，以及制取赤血盐等。

(1)氰化钠法将溶液加入到反应器中，加热至50℃，再慢慢加入硫酸亚铁溶液，在80℃下维持反应30～40min，游离氰根含量在0.01％～0.025％时反应结束。在反应完成液中加入适量氯化钙，以改善过滤操作和降低硫酸钠含量，从而提高亚铁氰化钠产品质量。其反应式如下：

(2)焦炉气副产回收法焦炉气中含有一定量的氢氰酸气体，经水吸收后的含氰废水，先用蒸汽解吸，放出的氰化氢在填充有铁刨花的塔中用纯碱液循环吸收，经沉降除杂得亚铁氰化钠。其反应式如下：

【安全性】毒性及防护：参见亚铁氰化钾。

包装及贮运：用内衬聚乙烯塑料袋的塑料编织袋铁桶包装，每袋净重25kg, 35kg,40kg和50kg。CAS号：。应贮存在通风、干燥的库房中。注意防潮，包装必须严密，避免日光曝晒。不可与酸类、碱类、铁盐及食用品共贮混运。失火时，可用水、砂土扑救。禁用酸碱式泡沫灭火器。

2.铁氰化钾（六氰合铁酸三钾）

【别名】赤血盐钾；赤血盐；六氰合铁（Ⅲ）酸钾

【物化性质】深红色或红色单斜晶系柱状结晶或粉末。相对密度1.85,溶于水、丙酮，不溶于乙醇、及液氨中。经灼烧可完全分解，产生剧毒和氰。但在常温下，固体赤血盐钾却十分稳定。其水溶液带有黄绿色荧光，受光及碱作用易分解，遇亚铁盐则生成深蓝色沉淀（滕氏蓝）。其热溶液能被酸及酸式盐分解，放出剧毒的氰化氢气体。

【质量标准】国家标准《化学试剂六氰合铁（Ⅲ）酸钾（铁氰化钾）》 GB/ T644-2011

【用途】用于印刷制版，彩色电影胶片的氧化、漂白及着色，照相洗印及显影，制晒蓝图纸，制药（抗菌增效剂、PMP等），制裁剪用蓝色划线粉。也用于电镀、制革、制纸及肥料中。印染工业中用作染苯胺黑，钢铁工业中用作渗碳剂，还可用作钼矿浮选剂。

(1)氯气氧化法黄血盐钾热溶液在氯气作用下，于60～65℃进行氧化生成赤血盐钾。控制反应料液pH值为6～7时，停止通入氯气，再加入饱和溶液，并以硫酸高铁铵检验为棕红色为止。用盐酸调节物料的酸碱度，使pH值为7～8，反应后物料经沉降、过滤、真空蒸发至溶液相对密度为l.2时，再经冷却结晶、离心分离、干燥，得赤血盐钾成品。其反应式如下：

(2）电解法将黄血盐钾的饱和溶液进行电解氧化，再经结晶、分离、干燥制得赤血盐钾成品。其反应式如下：

毒性及防护：本品无毒。但灼热分解或遇酸产生剧毒氰化物，防护措施参见氰化钾。

包装及贮运：用内衬聚乙烯塑料袋的编织袋或木箱包装，每袋净重25kg、50kg。化学试剂为500g瓶装。CAS号：。贮存于通风、于燥的库房中，包装必须严密。不可与酸类、碱类、铁盐及食用物品共贮混运。搬运人员要戴口罩、手套、穿工作服。运输过程中要防雨防潮。失火时，可用水、黄砂扑救，不可用酸碱式泡沫灭火器。

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1、生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验实验八实验八凝胶过滤分离高铁血红凝胶过滤分离高铁血红蛋白与高铁氰化钾蛋白与高铁氰化钾生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验n 了解凝胶层析的原理及应用了解凝胶层析的原理及应用n 通过血红蛋白脱盐实验，初步掌通过血红蛋白脱盐实验，初步掌握凝胶层析技术握凝胶层析技术实验目的实验目的生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验 凝胶过滤层析：凝胶过滤层析： 是利用具有网状结构的凝胶的分子是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离，也称分子筛层析、不同来进行分离，也称分子筛层

2、析、排阻层析排阻层析实验原理实验原理生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验 单个凝胶珠本身象单个凝胶珠本身象“筛子筛子”。不同类型凝胶的。不同类型凝胶的筛孔的大小不同。筛孔的大小不同。交联葡聚糖的凝胶颗粒交联葡聚糖的凝胶颗粒生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验分子筛效应：分子筛效应： 大分子在前，小分子在后大分子在前，小分子在后生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验u 高铁血红蛋白分子量大高铁血红蛋白分子量大(MetHb(MetHb，红褐色，红褐色，Mw=64500)Mw=64500)， 完全排阻完全排阻Hb K3Fe(CN)6MetHbu 高铁氰化钾分子量小高

3、铁氰化钾分子量小(K3Fe(CN)6(K3Fe(CN)6，黄色，黄色，Mw=327.25) Mw=327.25) ，可完全进入凝胶颗粒网孔内，可完全进入凝胶颗粒网孔内，从而达到分离的目的从而达到分离的目的 生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验交联葡聚糖交联葡聚糖高铁血红蛋高铁血红蛋白与高铁氰白与高铁氰化钾混合物化钾混合物高铁血红蛋白高铁血红蛋白高铁氰化钾高铁氰化钾生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验临床应用：临床应用：血液透析血液透析 透析液透析液浓缩的蛋白浓缩的蛋白混合样品混合样品透析袋透析袋开始透析开始透析处于平衡状态处于平衡状态 透透 析析 法：法：生物化学与分子

4、生物学实验生物化学与分子生物学实验 钼酸铵钼酸铵 + + 氨基萘酚磺酸氨基萘酚磺酸 + + 磷酸盐磷酸盐钼蓝蓝色）钼蓝蓝色） 15% 15%三氯醋酸三氯醋酸+ +蛋白质蛋白质变性、沉淀变性、沉淀生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验实验器材与试剂实验器材与试剂 层析管、分液漏斗、吸管、透析袋、磁层析管、分液漏斗、吸管、透析袋、磁力搅拌器力搅拌器 血红蛋白溶血红蛋白溶液液 交联葡聚糖交联葡聚糖G-25 0.4% K3Fe(CN)6 氨基萘酚磺酸试氨基萘酚磺酸试剂剂 钼酸铵试钼酸铵试剂剂 15%三氯醋酸三氯醋酸 0.1M磷酸缓冲液磷酸缓冲液生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验

5、实验步骤实验步骤u 凝胶的处理凝胶的处理G-25G-25颗粒颗粒(5g)(5g)蒸馏水室温溶胀蒸馏水室温溶胀去除杂质去除杂质1010倍体积的蒸馏水浸泡倍体积的蒸馏水浸泡( (过夜过夜) )生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验u 装柱装柱固定在铁架上固定在铁架上加入缓冲液没过砂芯加入缓冲液没过砂芯将凝胶缓缓注入管内将凝胶缓缓注入管内自然沉降至柱床高度达自然沉降至柱床高度达20cm20cm以上以上 不可露出创面不可露出创面 盖滤纸盖滤纸层析管洗净、排出管中气泡层析管洗净、排出管中气泡关闭出口关闭出口关闭出口关闭出口打开出口打开出口生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验装柱要求

6、装柱要求: 延续延续 均匀均匀 无气泡无气泡 无分层无分层 床面平整床面平整生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验 层析柱稳定后接储液瓶，打开出口，层析柱稳定后接储液瓶，打开出口，用两倍于床体积的缓冲液洗脱平衡用两倍于床体积的缓冲液洗脱平衡(5-10min )，不可露出床面，关闭出口，不可露出床面，关闭出口u 平衡平衡生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验u 加样加样准备血红蛋白准备血红蛋白(3 (3滴滴) )与与K3Fe(CN)6 (8K3Fe(CN)6 (8滴滴) )混合液混合液自距床面自距床面1mm1mm高处靠壁缓慢、均匀加入高处靠壁缓慢、均匀加入至液面降至与凝胶面相

7、平至液面降至与凝胶面相平放掉多余缓冲液至刚露出床面放掉多余缓冲液至刚露出床面打开出口打开出口生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验u 洗脱与收集洗脱与收集至洗脱液刚好流入床面至洗脱液刚好流入床面再加洗脱液至再加洗脱液至3-4cm3-4cm高高连接储液瓶连接储液瓶 调节活塞调节活塞1 1滴滴/5/5秒进行洗脱秒进行洗脱缓慢加入样品量体积的洗脱液缓慢加入样品量体积的洗脱液（不冲破胶面）（不冲破胶面）打开出口打开出口关闭出口关闭出口收集红褐色的收集红褐色的MetHbMetHb色带色带生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验带网孔的带网孔的葡聚糖珠葡聚糖珠小分子进入小分子进入葡聚糖珠

8、内葡聚糖珠内大分子不能大分子不能进入珠内，进入珠内，经珠之间缝经珠之间缝隙流出隙流出凝胶过滤层析过程示意图凝胶过滤层析过程示意图生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验用洗耳球从层析柱下口慢慢将柱中用洗耳球从层析柱下口慢慢将柱中的凝胶吹至小烧杯中回收的凝胶吹至小烧杯中回收u 洗脱与收集洗脱与收集将黄色的将黄色的K3Fe(CN)6色带完全洗脱后，色带完全洗脱后，用用23倍柱床体积的洗脱液冲洗凝胶倍柱床体积的洗脱液冲洗凝胶生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验将将MetHb洗脱液装洗脱液装入透析袋入透析袋将透析袋将透析袋口用止水口用止水夹密封夹密封 打开磁力搅打开磁力搅拌器，透析

9、拌器，透析30分钟分钟 将透析袋悬将透析袋悬入装有蒸馏入装有蒸馏水的烧杯中水的烧杯中u 透析透析生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验 磷酸盐的鉴定磷酸盐的鉴定试剂量试剂量 钼酸铵试钼酸铵试剂剂氨基萘酚磺氨基萘酚磺酸试剂酸试剂反应结反应结果果透析前杯透析前杯内蒸馏水内蒸馏水1515滴滴2 2滴滴3 3滴滴？透析后杯透析后杯内蒸馏水内蒸馏水1010滴滴2 2滴滴3 3滴滴？u 鉴定鉴定生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验 蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定试液量试液量15%15%三氯醋酸三氯醋酸反应结果反应结果透析前杯内蒸透析前杯内蒸馏水馏水40滴滴20滴滴？透析后杯内蒸透析后杯内蒸

10、馏水馏水40滴滴20滴滴？透析袋内溶液透析袋内溶液10滴滴5滴滴？生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验l 装柱后检查凝胶是否均匀，若有气泡装柱后检查凝胶是否均匀，若有气泡或分层时，加入缓冲液搅动后静置或者或分层时，加入缓冲液搅动后静置或者重新装柱，保持柱床面平整；重新装柱，保持柱床面平整；l 洗脱时流速不可太快或太慢；洗脱时流速不可太快或太慢；l 透析袋中的液体不可装满，否则会将透析袋中的液体不可装满，否则会将透析袋胀破。透析袋胀破。本卷须知本卷须知生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验 磷酸盐的鉴定磷酸盐的鉴定试剂量试剂量钼酸铵试剂钼酸铵试剂氨基萘酚磺酸试剂氨基萘酚磺酸

11、试剂反应结果反应结果透析前杯内透析前杯内蒸馏水蒸馏水15滴滴2滴滴3滴滴透析后杯内透析后杯内蒸馏水蒸馏水10滴滴2滴滴3滴滴无无蓝色蓝色实验结果实验结果生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验 蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定试液量试液量15%三氯醋酸三氯醋酸反应结果反应结果透析前杯内蒸馏水透析前杯内蒸馏水40滴滴20滴滴透析后杯内蒸馏水透析后杯内蒸馏水40滴滴20滴滴透析袋内溶液透析袋内溶液10滴滴5滴滴无无无无有沉淀有沉淀生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验 MetHb MetHb的相对分子量较大，直径大于的相对分子量较大，直径大于凝胶网孔被完全排阻在孔外，只能在凝胶网孔被完全

12、排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外的空间向下流动，流程较凝胶颗粒外的空间向下流动，流程较短，移动速度快，首先流出短，移动速度快，首先流出生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验l K3Fe(CN)6的相对分子质量较小，直的相对分子质量较小，直径小于凝胶网孔可完全渗透进入凝胶颗径小于凝胶网孔可完全渗透进入凝胶颗粒的网孔，在向下移动过程中流程较长，粒的网孔，在向下移动过程中流程较长，移动速度慢，最后流出移动速度慢，最后流出生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验l 磷酸盐是小分子，小于透析袋孔磷酸盐是小分子，小于透析袋孔径的小，能够穿过透析袋；而蛋白质径的小，能够穿过透析袋；而蛋白质是大分子，不能透过透析袋，只能保是大分子，不能透过透析袋，只能保留在袋中留在袋中生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验u向凝胶柱中加入样品时，为什么必须保持胶向凝胶柱中加入样品时，为什么必须保持胶面平整？上样体积为什么不能太大？面平整？上样体积为什么不能太大？u请解释为什么在洗脱样品时，流速不能太快请解释为什么在洗脱样品时，流速不能太快或太慢？或太慢？u圆盘电泳的