盐酸胍溶解氢键不如医用尿素是配料不对吗？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2022-07-15 08:52 标签： 尿素和乙酸反应

强用力的蛋白质变性剂，

构的破坏消失而迅速与核酸分离。

胍盐是破坏蛋白质三维结构的离液剂，

质变性剂中作用最强的是异硫氰酸胍，它们可以使多数蛋白质转换成一随机的卷曲状态

有强力的阴离子和阳离子基团

它们可以形成较强的氢键。在还原剂存在的情况下，异硫氰

存在的情况下，可以破坏疏水作用。

盐酸胍是一个核酸酶的强抑制剂，它并不是一种足够强的变性剂，可以允许完整的

变性蛋白和盐酸胍、尿素优先结合，形成变性蛋

天然状态的蛋白不断转变为复合物，最终导致蛋白质完全变性；

酸的增溶作用，能形成氢键，当浓度高时

能破坏水的氢键结构，结果盐酸胍、尿素就称为

非极性残基的较好溶剂，使蛋白质内部的疏水残基伸展和溶解性加强

高浓度尿素使蛋白质变性并抑制

的还原剂，同时氧化后能被谷胱甘肽还原酶原位释放

提取中，常使用巯基乙醇，维持

缓冲液的还原环境，防止多酚类氧化，由于具有一定的毒性，浓度不应高于

巯基乙醇的主要作用是破坏

蛋白质中的二硫键（肽和蛋白质分子中的

若氧化，核酸会变成灰黑色，苯酚的氧化产物苯醌等氧化物引起磷酸二酯

巯基乙醇还原二硫键，使

强用力的蛋白质变性剂，能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎，核蛋白由于其二级

结构的破坏消失而迅速与核酸分离。胍盐是破坏蛋白质三维结构的离液剂，在通常使用的

蛋白质变性剂中作用最强的是异硫氰酸胍，它们可以使多数蛋白质转换成一随机的卷曲状

含有强力的阴离子和阳离子基团，

它们可以形成较强的氢键。

在还原剂存在的情况下，

异硫氰酸胍可以断裂氢键，而去垢剂，如

存在的情况下，可以破坏疏水作用。

盐酸胍是一个核酸酶的强抑制剂，

它并不是一种足够强的变性剂，

可断裂氢键，有两种可能机制：

变性蛋白和盐酸胍、尿素优先结合，形成变性

变性剂复合物，当复合物被除去，从而引起

反应平衡向右移动，随着变性剂浓度

增加，天然状态的蛋白不断转变为复合物，最终导致蛋白质完全变性；

氨基酸的增溶作用，能形成氢键，当浓度高时，能破坏水的氢键结构，结果盐酸胍、尿素

就称为非极性残基的较好溶剂，使蛋白质内部的疏水残基伸展和溶解性加强，盐酸胍、尿

素引起的变性往往是不可逆的。

高浓度尿素使蛋白质变性并抑制

包涵体的纯化和复性总结

通常的洗涤方法一般是洗不干净的，我以前是这么做的，先把包涵体用

充分，过滤除去未溶解的物质，注意留样跑电泳，然后用水稀释到

如此类推可以一直稀释到合适的浓度，你可以找到一个合适去除杂质的

办法，其实这就是梯度沉淀的方法，我觉得比通常的直接洗脱效果好。

包涵体一般难溶解，所以你要注意未溶解的部分，你可以跑电泳对比，因为有时候难溶

解的就是你的目标蛋白，

所以每次处理都要把上清和沉淀跑电泳对比，

此外刚处理完的包涵体好溶解。冷冻后难溶解，溶解也需要长点时间，也需要大量的溶

剂。如果说是不少不溶解的不是你要的，那就不用管了。

、如何得到比较纯的包涵体

对于包涵体的纯化，包涵体的前处理是很重要的。

包涵体中主要含有重组蛋白

巯基乙醇等反复多次进行，

液离子强度升高而加强，

这样提取的包涵体纯度至

也可用低浓度的盐酸胍或尿素

还原剂等洗去包涵体表面吸附的大部分不溶性杂蛋白。洗涤液

相近为宜，使用的还原剂为

脱氧胆酸盐和低浓度的变性剂如尿素充分洗涤去除杂质

尿素中具有蛋白水解酶活性

复性过程中可导致重组蛋白质的降解。

对于尿素和盐酸胍的选择：

尿素和盐酸胍属中强度变性剂，

易经透析和超滤除去。它们对包涵体氢键有较强的可逆

。尿素溶解包涵体较盐酸胍慢而弱，溶

尿素在作用时间较长或温度较高时会裂解形成氰酸盐，

氨基进行共价修饰，但用尿素溶解具有不电离，呈中性，成本低，蛋白质复性后除去不

会造成大量蛋白质沉淀以及溶解的包涵体可选用多种色谱法纯化等优点，

以上，且溶解作用快而不造成重组蛋白质的共价修饰。但它也有

在酸性条件下易产生沉淀、复性后除去可能造成大量蛋白质沉淀和对蛋白质离

子交换色谱有干扰等缺点。

包涵体最后的纯化，一般是离子交换，疏水，或者是亲和层析，亲和层析尤其是金属螯

合层析用得比较广泛，而纯化的效果也不错，通常是一步就能达到纯度为

高浓度尿素溶解后离心获得的包涵体溶解液，

度冰箱过夜后出现沉淀，

开始感觉很奇怪，后来发现是我们的冰箱的温控出了问题实验

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