正辛烷作为内标的稀释倍数?

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1、气相色谱法在药典中的应用摘要:本文通过介绍气相色谱检验的操作过程,选取中国药典中的部分例子说明了气相色谱法在对药物的鉴别、检查、含量测定中的应用,还介绍了气相色谱法在乙醇量测定法;甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法;2-乙基己酸测定法;残留溶剂测定法中的运用以及气相色谱-质谱联用。关键词:气相色谱、中国药典、应用气相色谱法(gas chromatography , GC)是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术成就。系采用气体为流动相(载气)流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。物质或其衍生物气化后,被载气带入色谱柱进行分离,各组分先后进入检测器,用数据处理系统记录色谱信号。采用高灵敏选择

2、性检测器,使得它又具有分析灵敏度高、应用范围广等优点。这是一种新的分离、分析技术,它在工业、农业、国防、建设、科学研究中都得到了广泛应用。一 气相色谱法检验标准操作规程1(一)对仪器的一般要求所用的仪器为气相色谱仪,由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成(如图1所示)。进样部分、色谱柱和检测器的温度均应根据分析要求适当设定。图1 气相色谱仪示意图1.载气源 气相色谱法的流动相为气体,称为载气,氦、氮和氢可用作载气,可由高压瓶或高纯度气体发生器提供,经过适当的减压装置,以一定的流速经过进样器和色谱柱;根据供试品的性质和检测器种类选择载气,除另有规定外,常用载气为氮气。2.

3、进样部分 进样方式一般可采用溶液直接进样、自动进样或顶空进样。 溶液直接进样采用微量注射器、微量进样阀或有分流装置的气化室进样;采用溶液直接进样或自动进样时,进样口温度应高于柱温3050 ;进样量一般不超过数微升;柱径越细,进样量应越少,采用毛细管柱时,一般应分流以免过载。 顶空进样适用于固体和液体供试品中挥发性组分的分离和测定。将固态或液态的供试品制成供试液后,置于密闭小瓶中,在恒温控制的加热室中加热至供试品中挥发性组分在液态和气态达至平衡后,由进样器自动吸取一定体积的顶空气注入色谱柱中(如图2所示)。图2顶空进样过程示意图3. 色谱柱 色谱柱为填充柱或毛细管柱。填充柱的材质为不锈钢或玻璃,

4、内径为24mm,柱长为24m,内装吸附剂、高分子多孔小球或涂渍固定液的载体,粒径为0.180.25mm、0.150.18mm、或0.1250.15mm。常用载体为经酸洗并硅烷化处理的硅藻土或高分子多孔小球,常用固定液有甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。毛细管柱的材质为玻璃或石英,内壁或载体经涂渍或交联固定液,内径一般为0.25mm、0.32mm或0.53mm,柱长560m,固定液膜厚0.15.0m,常用的固定液有甲基聚硅氧烷、不同比例组成的苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。 新填充柱和毛细管柱在使用前需老化处理,以除去残留溶剂及易流失的物质,色谱柱如长期未用,使用前应老化处理,使基线稳定。4. 柱温箱 由

5、于柱温箱稳定的波动会影响色谱分析结果的重现性,因此柱温箱精度应在1,且温度波动小于每小时0.1。温度控制系统分为恒温和程序升温两种。5. 检测器 适合气相色谱法的检测器有火焰离子化检测器(FID)、热导检测器(TCD)、氮磷检测器(NPD)、火焰光度检测器(FPD)、电子捕获检测器(ECD)、质谱检测器(MS)等。火焰离子化检测器对碳氢化合物响应良好,适合检测大多数的药物;氮磷检测器对含氮、磷元素的化合物灵敏度高;火焰光度检测器对含磷、硫元素的化合物灵敏度高;电子捕获检测器适于含卤素的化合物;质谱检测器还能给出供试品某个成分相应的结构信息,可用于结构确证。除另有规定外,一般用火焰离子化检测器,

6、用氢气作为燃气,空气作为助燃气。在使用火焰离子化检测器时,检测器的温度一般应高于柱温,并不得低于150 ,以免水汽凝结,通常为250350 。6. 数据处理系统 可分为记录仪、积分仪以及计算机工作站等。各品种项下规定的色谱条件,除检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱柱材料不得改变外,其余如色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏度等,均可适当改变,以适应具体品种并符合系统适用性试验的要求。一般色谱图约于30分钟内记录完毕。(二)系统适用性试验色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。其中,分离度和重复性是尤为重要。

7、除另有规定外,按各品种项下要求对色谱系统进行适用性试验,即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验,必要时,可对色谱系统进行适当调整,以符合要求。1. 色谱柱的理论板数(n) 用于评价色谱柱的分离效能。由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同,采用理论板数作为衡量柱效能的指标时,应指明测定物质,一般为待测组分或内标物质的理论板数。在规定的色谱条件下,注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液,记录色谱图,量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间tR(以分钟或长度计,下同,但应取相同单位)和峰宽(W)或半高峰宽(Wh/2

8、h/2) 2计算色谱柱的理论板数。2. 分离度(R) 用于评价待测组分与相邻共存物或难分离物质之间的分离程度,是衡量色谱系统效能的关键指标。可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度,也可以通过测定待测组分与某一添加的指标性成分(内标物质或其他难分离物质)的分离度,或将供试品或对照品用适当的方法降解,通过测定待测组分与某一降解产物的分离度,对色谱系统进行评价与控制。无论是定性鉴别还是定量分析,均要求待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分离度。除另外有规定外,待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于1.5。分离度的计算公式为:R= 或R=式中 tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间; tR

9、1为相邻两峰中前一峰的保留时间; W1、W2及W1,h/2、W2 ,h/2分别为此相邻两峰的峰宽及半高峰宽。(如图3所示)图3当对测定结果有异议时,色谱柱的理论板数(n)和分离度(R)均以峰宽(W)的计算结果为准。3. 重复性 用于评价连续进样中,色谱系统响应值的重复性能。采用外标法时,通常取各品种项下的对照品溶液,连续进样5次,除另有规定外,其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0;采用内标法时,通常配制相当于80、100和120的对照品溶液,加入规定量的内标溶液,配成3种不同浓度的溶液,分别至少进样2次,计算平均校正因子。其相对标准偏差也应不大于2.0。4. 拖尾因子(T) 用于评价色谱

10、峰的对称性。为保证分离效果和测量精度,应检查待测峰的拖尾因子是否符合各品种项下的规定。拖尾因子计算公式为:T=式中 W0.05h为0.05峰高处的峰宽; d1为峰极大至峰前沿之间的距离。(如图4所示)图4除另有规定外,峰高法定量时T应在0.951.05之间。 峰面积法测定时,若拖尾严重,将影响峰面积的准确测量。必要时,应在各品种项下对拖尾因子作出规定。(三)测定法1. 内标法 按各品种项下的规定,精密称(量)取对照品和内标物质,分别配成溶液,精密量取各适量,混合配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器,记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高,按下式计算校正因子:校正因子(f)=式

11、中 AS为内标物质的峰面积或峰高;AR为对照品的峰面积或峰高;CS为内标物质的浓度;CR为对照品的浓度。再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液,注入仪器,记录色谱图,测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高,按下式计算含量:含量(cx)f式中 AX为供试品(或其杂质)峰面积或峰高;CX为供试品(或其杂质)的浓度;AS为内标物质的峰面积或峰高;cS为内标物质的浓度;f为较正因子。采用内标法,可避免因样品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。2. 外标法 按各品种项下的规定,精密称(量)取对照品和供试品,配制成溶液,分别精密取一定量,注入仪器,记录色谱图,测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的

12、峰面积(或峰高),按下式计算含量:含量(cX)=cR式中 CR为对照品的浓度; AR为对照品的峰面积或峰高; AX为供试品(或其杂质)峰面积或峰高。由于微量注射器不易精确控制进样量,当采用外标法测定供试品中成分或杂质含量时,以定量环或自动进样器进样为好。3. 面积归一法 按各品种项下的规定,配制供试品溶液,取一定量注入仪器,记录色谱图。测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积,计算各峰面积占总峰面积的百分率。 用于杂质检查时,由于峰面积归一化法测定误差大,因此,通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外,一般不宜用于微量杂质的检查。5. 标准溶液加入法 精密称(量)取某个杂

13、质或待测成分对照品含量,配制成适当浓度的对照品溶液,取一定量,精密加入到供试品溶液中,根据外标法或内标法测定杂质或主成分含量,再扣除加入的对照品溶液含量,即得供试液溶液中某个杂质和主成分含量。也可按下述公式进行计算,加入对照品溶液前后校正因子应相同,即: =则待测组分的浓度cx可通过如下公式进行计算:cX=式中 cX为供试品中组分X的浓度;AX为供试品中组分X的色谱峰面积;cX为所加入的已知浓度的待测组分对照品的浓度;Ais为加入对照品后组分X的色谱峰面积。由于气相色谱法的进样量一般仅数微升,为减小进样误差,尤其当采用手工进样时,由于留针时间和室温等对进样量也有影响,故以采用内标法定量为宜;当

14、采用自动进样器时,由于进样重复性的提高,在保证分析误差的前提下,也可采用外标法定量。当采用顶空进样时,由于供试品和对照品处于不完全相同的基质中,故可采用标准溶液加入法以消除基质效应的影响;当标准溶液加入法与其他定量方法结果不一致时,应以标准加入法结果为准。二 气相色谱法在鉴别中的应用按各药品项下规定配置对照品溶液与供试品溶液,各取一定量,注入气相色谱仪,供试品溶液色谱中应呈现与对照品溶液色谱峰保留时间一致的色谱峰。如在鉴别中药乳香中的索马里乳香2,取含量测定项下挥发油适量,加无水乙醇制成每1mL含2.5mL的溶液,作为供试品溶液。另取对照品溶液。照气相色谱法(附录 E)试验,以聚乙二醇(PEG

15、-20M)毛细管柱,程序升温;初始温度50,保持3分钟,以每分钟25的速率升温至200,保持1分钟;进样口温度为200,检测器温度为220,分流比为20:1。理论板数俺-蒎烯峰计算不低于7000,分别取对照品溶液与供试品溶液各1L,注入气相色谱仪,供试品溶液色谱中应呈现与对照品溶液色谱峰保留时间一致的色谱峰。又如丙戊酸钠片的鉴别3,临用新制,取本品 10 片,除去糖衣,精密称定,研细,取细粉适量(约相当于丙戊酸钠0.5g),置分液漏斗中,加水10mL ,加稀硫酸5mL ,振摇使溶解,用二氯甲烷提取3次,每次20mL,合并二氯甲烷液,加无水硫酸钠适量,振摇,滤过,滤液置旋转蒸发器上蒸干(温度不超

16、过30) ,加二氯甲烷适量, 振摇使残渣溶解,定量转移至100mL 量瓶中,用二氯甲烷稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。取供试品溶液1mL,置10mL量瓶中,用二氯甲烷稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。另取丙戊酸钠对照品约10mg ,置分液漏斗中,加水10mL ,加稀硫酸5mL ,振摇,用二氯甲烷提取3次,每次20mL,合并二氯甲烷液,加无水硫酸钠适量,振摇,滤过,滤液置旋转蒸发器上蒸干(温度不超过30C) ,精密加入二氯甲烷20mL ,振摇使残渣溶解,摇匀,作为对照品溶液。照有关物质项下的色谱条件,精密量取供试品溶液与对照品溶液各1L,分别注入气相色谱仪,记录色谱图。供试品溶液主峰的保留时间

17、应与对照品溶液主峰的保留时间一致。三 气相色谱法在检查中的应用(一) 内标法(内标校正因子法和内标工作曲线法)可消除进样量不准确误差,GC进样量一般为1L,液相是10L、20L,GC更易出现进样误差,自动进样器准确度可满足要求,手动进样最好用内标法定量。需要内标物。按各品种项下的规定,精密称(量)取对照品和内标物质,分别配成溶液,精密量取各适量,混合配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器,记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高,按按本文第二部分所述方法计算结果。如检查二甲基亚砜中德二甲基砜4,取本品,精密称定,用内标溶液(0.025%二苯甲烷的丙酮溶液)稀释制成50%,作为供试

18、品溶液;取二甲基砜对照品适量,精密称定,用上述内标溶液稀释制成0.050%的溶液,作为对照品溶液,照气相色谱法(附录 E)试验,以10%聚乙二醇20M为周定液,柱温为150,理论板数按二甲基砜峰计算不低于1500,二甲基砜峰与内标峰的分离度应大于2.0。精密量取供试品溶液与对照品溶液各21,分别注入气相色谱仪,记录色谱图。供试品溶液中二甲基砜与二苯甲烷峰面积的比值,不得大于对照品溶液中二甲基砜与二苯甲烷峰面积的比值。(二) 外标法(外标一点法和工作曲线法)按各品种项下的规定,精密称(量)取对照品和供试品,配制成溶液,分别精密取一定量,注入仪器,记录色谱图,测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的

19、峰面积(或峰高),按本文第二部分所述方法计算结果。如检查艾片(左旋龙脑)中异龙脑和樟脑5,取本品适量,精密称定,加乙酸乙酯制成每1mL含15mg的溶液,作为供试品溶液。另取异龙脑对照品,加乙酸乙酯制成每1mL含2mg的溶液,作为对照品溶液。照气相色谱法(附录 E)试验色谱条件与系统适用性试验聚乙二醇20000(PEG一20M)毛细管柱(柱长为30m,内径为0.53mm,膜厚度为1.0m),柱温为170。理论板数按龙脑峰计算应不低于3000。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1L,注入气相色谱仪,测定,计算,即得。本品含异龙脑(C10H18O)不得过5.0。樟脑取检查异龙脑项下的供试品溶液作为

20、供试品溶液。另取樟脑对照品适量,精密称定,加乙酸乙酯制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照前述方法测定,计算,即得。本品含樟脑(C10H16O)不得过10.0。(三)面积归一法粗略考察,需全部出峰且都被检测到,溶剂峰去掉,不易用于微量杂质的检查,一般用于同系物的含量测定。如甘油(供注射用)检查中二甘醇、乙二醇与其他杂质6,取本品约10 g ,精密称定,置25mL 量瓶中,精密加入内标溶液(每1mL 中含0.5mg 正己醇的甲醇溶液)5mL,用甲醇溶解并稀释至刻度,作为供试品溶液。取二甘醇、乙二醇适量,精密称定,用甲醇溶解并稀释制成每1mL, 中含二甘醇、乙二醇各0 . 5mg 的溶

21、液。精密量 取5mL ,置25mL 量瓶中,精密加入内标溶液5mL, 用甲醇稀释至刻度,作为对照品溶液。另取二甘醇、乙二醇、正己醇和甘油 适量,精密称定,用甲醇溶解并稀释制成每 1mL 中含甘油400mg、二甘醇、乙二醇、正己醇各0.lmg 的溶液,作为系统适用性试验溶液。照气相色谱法(附录V E),用(6%) 氰丙基苯基-(94% ) 二甲基聚硅氧烷为固定液(或极性相近的固定液)的毛细管柱,程序升温,起始温度为10CTC,维持4 分钟,以每分钟50C的速率升温至120C ,维持10分钟,再以每分钟50C的速率升温至220C ,维持6分钟;进样口温度为200C;检测器温度为250C ;。取系统

22、适用性试验溶液1L,注入气相色谱仪,记录色谱图,各组分色谱峰之间的分离度应符合要求。取对照品溶液重复进样,二甘醇和乙二醇峰面积与内标峰面积比值的相对标准偏差均不得大于5% 。依次精密量取供试品溶液和对照品溶液各1L,注入气相色谱仪,记录色谱图,按内标法以峰面积计算,供试品中含二甘醇与乙二醇均不得过0.025%; 如有其他杂质峰,扣除内标峰按面积归一化法计算,单个未知杂质不得过0.1%;杂质总量(包含二甘醇、乙二醇)不得过1. 0% 。又如硬脂酸镁检查中硬脂酸与棕榈酸相对含量测定7,取本品 0.lg,精密称定,置锥形瓶中,加三氟化硼的甲醇溶液取三氟化硼一水合物或二水合物适量(相当于三氟化硼14g

23、) ,加甲醇溶解并稀释至 100mL ,摇匀5mL ,摇匀,加热回流10 分钟使溶解,从冷凝管加正庚烷4mL ,再回流 10 分钟,放冷后加饱和氯化钠溶液20mL ,振摇,静置使分层,将正庚烷层通过装有无水硫酸钠 0. l g (预先用正庚烷洗涤)的玻璃柱,移入烧杯中,作为供试品溶液。照气相色谱法(附录V E) 试验。用聚乙二醇20 M为固定相的毛细管柱,起始柱温70 C ,维持2 分钟,以每分钟 5C 的速率升温至 240 C ,维持 5 分钟;进样口温度为220C ,检测器温度为260C 。分别称取棕榈酸甲酯与硬脂酸甲酯对照品适量,加正庚烷制成每 1mL 中分别约含 15mg 与1Omg

24、的溶液,取1L注入气相色谱仪,棕榈酸甲酯峰与硬脂酸甲酯峰的分离度应大于 3.0 。精密量取供试品溶液 1mL ,置100mL 量瓶中,用正庚烷稀释至刻度,摇匀,取1L注入气相色谱仪,调节检测灵敏度,使棕榈酸甲酯峰与硬脂酸甲酯峰应能检出。再取供试品溶液1L注入气相色谱仪,记录色谱图,按下式面积归一化法计算硬脂酸镁中硬脂酸在脂肪酸中的百分含量。硬脂酸百分含量() = * 100 % 式中 A 为供试品中硬脂酸甲酯的峰面积;B 为供试品中所有脂肪酸酯的峰面积。 同法计算硬脂酸镁中棕榈酸在总脂肪酸中的百分含量。 硬脂酸相对含量不得低于40%, 硬脂酸与棕榈酸相对含量的总和不得低于 90% 。(四)标准

25、溶液加入法如检查苯甲醇中的苯甲醛8,取本品作为供试品溶液;另取苯甲醛约50mg ,精密称定,置50mL 量瓶中,加水振摇使溶解,用水稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。照气相色谱法(附录VE) 试验 ,以聚乙二醇20M 为固定液,涂布浓度约为10%; 进样口温度为200C; 检测器温度为250C; 柱温为130C 。精密量取同体积的供试品溶液与对照品溶液,注入气相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积计算,含苯甲醛不得过0.2% 。又如检查依托咪酯注射液中的1,2- 丙二醇9,取正辛醇适量,用甲醇溶解并稀释制成 每1mL 中含 0.2mg 的溶液,作为内标溶液。精密量取本品1mL置于100mL量瓶

26、中,用内标溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密量取5mL ,置50mL 量瓶中,用内标溶液稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液;另精密称取1 ,2-丙二醇对照品适量,用内标溶液定量稀释制成每 1mL 中含 1,2- 丙二醇 0.35mg 的溶液,作为对照品溶液。照气相色谱法(附录VE) 测定。以聚乙二醇(或极性相近)为固定液;程序升温:初始温度为120C,维持 3 分钟,以每分钟10C 的速率升温至230 C, 维持5 分钟;进样口温度为220C ;检测器温度为250C 。取1,2- 丙二醇、1,3-丙二醇与二甘醇适量,用内标溶液溶解并稀释制成每 1mL 中分别含0.35mg 的混合溶液,取1L 注

27、入气相色谱仪,记录色谱图。出峰顺序依次为内标物、1,2- 丙二醇、1,3- 丙二醇与二甘醇,各相邻峰之间的分离度均大于2.0 。理论板数按1,2- 丙二醇峰计算不低于 5000。再分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各注入气相色谱仪,记录色谱图,按内标法以峰面积计算,每1mL 中含1,2-丙二醇应为315mg385mg。四 气相色谱法在含量测定中的应用(一)内标法(内标校正因子法和内标工作曲线法)如扑米酮片的含量测定10,照气相色谱法(附录V E) 测定。色谱条件与系统适用性试验以硅酮(或极性相近)为固定相;涂布浓度为3%;柱温为260C 。扑米酮峰与内标物质峰的分离度应符合要求。校正因子测定,

28、取N- 苯基咔唑适量,用甲醇溶解并制成每1mL中含2.4mg的溶液作为内标溶液。取扑米酮对照品 约0 .15g ,精密称定,置50mL量瓶中,精密加入内标溶液25mL,振摇使扑米酮溶解(必要时加热使溶解),用甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密量取对照品溶液1L,注入气相色谱仪,计算校正因子。测定法,取本品20片,精密称定,研细,精密称取细粉适量(相当于扑米酮0. 15 g ),置50mL量瓶中,精密加入内标溶液25mL 和甲醇10mL, 水浴上加热5 分钟,并时时振摇,放冷,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液1L ,注入气相色谱仪,按内标法以峰面积计算,即得。(二)外标法(外

29、标一点法和工作曲线法)如小儿感冒口服液中百秋李醇的含量测定11,照气相色谱法(附录 E) 测定。色谱条件与系统适用性试验以甲基聚珪氧烷为固定相的毛细管柱(柱长为30m,内径为0. 22mm,膜厚度为0.25m);柱温为程序升温,初始温度110C,以每分钟5C的速率升温至160C ,保持20 分钟;分流进样。理论板数按百秋李醇峰计算应不低于50000。对照品溶液的制备,取百秋李醇对照品适量,精密称定,加正己烷制成每1mL含0.lmg的溶液,即得。供试品溶液的制备精密量取本品 100mL ,照挥发油测定法(附录X D)试验,自测定器上端加水至充满刻度部分,并溢流入烧瓶时为止,再加正己烷5mL, 连

30、接回流冷凝管,加热并保持微沸4 小时,放冷,待溶液分层清晰后,分取正己烷液,置10mL 量瓶中,用少量正己烷分次洗涤挥发油测定器内壁,正己烷洗液并同一量瓶中,加正己烷至刻度,摇匀,即得。 测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1L ,注入气相色谱仪,测定,即得。本品每1mL 含广藿香以百秋李醇(C15H26O) 计,不得少于8.5g。又如丙二醇的含量测定12,照气相色谱法(附录V E) 测定。色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇 20M 为固定相;起始温度为130C,维持1 分钟,以每分钟10C 的速率升温至 240C,维持 1 分钟,进样口温度 230C ,检测器温度250C 。理论板数按丙二

31、醇峰计算不低于10000。测定法取本品,精密称定,用无水乙醇稀释制成每1mL 中约含1mg的溶液,精密量取1L注入气相色谱仪,记录色谱图;另取丙二醇对照品,同法测定,按外标法以峰面积计算,即得。(三)面积归一法如硬脂酸的含量测定13,照气相色谱法(附录V E) 测定。色谱条件与系统适用性试验用聚乙二醇 20M 为固定液的毛细管柱;起始温度为170C,维持2 分钟,再以每分钟10C的速率升温至240C,维持数分钟,使色谱图记录至除溶剂峰外的第二个主峰保留时间的3倍;进样口温度为250C;检测器温度为260C。硬脂酸甲酯峰与棕榈酸甲酯峰的分离度应大于5.0。测定法,取本品约 O.1 g,精密称定,

32、置锥形瓶中,精密加三氟化硼的甲醇溶液(13% 15%)5mL 振摇使溶解,置水浴中回 流20 分钟,放冷,用正己烷10 15mL 转移并洗涤至分液漏斗中,加水10mL与氯化钠饱和溶液10mL,振摇分层,弃去下层(水层),正己烷层加无水硫酸钠6g 干燥除去水分后置25mL 量瓶中,用正已烷稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液;另取硬脂酸对照品约50mg与棕榈酸对照品约50mg,同上法操作制得对照 品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各1(J 注入气相色谱仪,记录色谱图。按面积归一化法以峰面积计算供试品中硬脂酸(C18H3602)与棕榈酸(C16H3202 )的含量 。药典中还有许多药物的检测运用了

33、气相色谱法,表1是中国药典2010版一部中药材与饮片涉及气相色谱法的品种统计。品 名检验项目对 照 品固 定 相其他试剂丁香含量测定丁香酚对照品聚乙二醇20000(PEG-20M),涂布浓度为10正己烷八角茴香含量测定反式茴香脑对照品聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱(柱长为30m,内径为0.32mm,膜厚度为0.25m)乙醇土木香含量测定土木香内酯对照品异土木香内酯对照品聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱(柱长为30m,内径为0.25mm,膜厚度为0.25m)乙酸乙酯千年健含量测定芳樟醇对照品DB-17毛细管柱(交联50苯基-50甲基聚硅氧烷为固定相)(柱长为30m,内径

34、为0.25mm,膜厚度为0.25m)乙酸乙酯广藿香含量测定百秋李醇对照品HP-5毛细管柱(交联5苯基甲基聚硅氧烷为固定相)(柱长为30m,内径为0.32mm,膜厚度为0.25m)正十八烷、正己烷、三氯甲烷小茴香含量测定反式茴香脑对照品聚乙二醇毛细管柱(柱长为30m,内径为0.32mm,膜厚度为0.25m)乙酸乙酯天然冰片(右旋龙脑)含量测定右旋龙脑对照品聚乙二醇20000(PEG-20M)为固定相,涂布浓度为10乙酸乙酯艾片(左旋龙脑)检查异龙脑对照品聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱(柱长为30m,内径为0.53mm,膜厚度为1.0m)乙酸乙酯樟脑对照品聚乙二醇20000(PEG-

35、20M)毛细管柱(柱长为30m,内径为0.53mm,膜厚度为1.0m)乙酸乙酯含量测定龙脑对照品聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱(柱长为30m,内径为0.53mm,膜厚度为1.0m)乙酸乙酯艾叶含量测定桉油精对照品甲基硅橡胶(SE-30)为固定相,涂布浓度为10正己烷石斛(金钗石斛)含量测定萘对照品石斛碱对照品DB-1毛细管柱(1.0二甲基聚硅氧烷为固定相)(柱长为30m,内径为0.25mm,膜厚度为0.25m)甲醇、甲酸亚麻子含量测定亚油酸对照品a-亚麻酸对照品聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱(柱长为30m,内径为0.32mm,膜厚度为0.5m)三氟化硼、甲醇、正辛烷

36、、氯化钠、石油醚(6090)、氢氧化钾冰片(合成龙脑)含量测定龙脑对照品聚乙二醇20000(PEG-20M)为固定相,涂布浓度为10乙酸乙酯豆蔻含量测定桉油精对照品甲基硅橡胶(SE-54)为固定相,涂布浓度10正己烷、无水硫酸钠乳香鉴别-蒎烯对照品聚乙二醇(PEG-20M)毛细管柱无水乙醇油松节含量测定-蒎烯对照品弹性石英毛细管柱(柱长为30m,内径为0.32mm,膜厚度为0.25m)DB-5(交联5苯基甲基聚硅氧烷为固定相)乙醇砂仁含量测定乙酸龙脑酯对照品DB-1毛细管柱(100二甲基聚硅氧烷为固定相)(柱长为30m,内径为0.25mm,膜厚度为0.25m)无水乙醇鸦胆子含量测定油酸对照品聚

37、乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱(柱长为30m,内径为0.25mm,膜厚度0.25m)正己烷、氮气、氢氧化钾、甲醇、三氟化硼、乙醚、氯化钠、苯甲酸苯酯、石油醚(6090)香薷含量测定麝香草酚对照品香荆芥酚对照品聚乙二醇(PEG)-20M为固定液,涂布浓度10无水乙醇麝香含量测定麝香酮对照品苯基(50)甲基硅酮(OV-l7)为固定相,涂布浓度为2无水乙醇表1 中国药典2010版一部涉及气相色谱法的品种统计表五 气相色谱法在乙醇量测定法14中的应用本法系采用气相色谱法(附录V E)测定制剂中在20C时乙醇(C2H5OH) 的含量(,mL/mL )。除另有规定外,按下列 方法测定。第一法(

38、毛细管柱法) (一)色谱条件与系统适用性试验用键合交联聚乙二醇为固定液的毛细管柱;起始温度为50,维持7分钟,再以每分钟10的速率升温至110;进样口温度 190C;检测器温度 220C。理论板数按正丙醇峰计算应不低于8000,乙醇峰与正丙醇峰的分离度应大于2.0。校正因子测定精密量取恒温至20的无水乙醇 4mL、5mL、6mL,分别置100mL量瓶中,分别精密加入恒温至20的正丙醇(内标物质)5mL,用水稀释至刻度,摇匀,精密量取上述各溶液1mL, 分别置100mL 量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀(必要时可进一步稀释),作为对照品溶液。取上述三种溶液各适量,注入气相色谱仪,分别连续进样3次,测

39、定峰面积,计算校正因子,所得校正因子的相对标准偏差不得大于2.0%。(二)测定法精密量取恒温至20的供试品适量(相当于乙 醇约5mL),置100mL 量瓶中,精密加入恒温至20的正丙醇 5mL,用水稀释至刻度,摇匀,精密量取该溶液1mL ,置100mL量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀(必要时可进一步稀释),作为供试品溶液。取1L注入气相色谱仪,测定,即得。 第二法(填充柱法) (三)色谱条件与系统适用性试验用直径为0.18 O.25mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为载体;柱温为 120150。理论板数按正丙醇峰计算应不低于700,乙醇峰与正丙醇峰的分离度应大于2.0。校正因子测定精密量

40、取恒温至 20C 的无水乙醇 4mL、5mL、6mL,分别置100mL量瓶中,分别精密加入恒温至20C的正丙醇(内标物质)5mL,用水稀释至刻度,摇匀(必要时可进一歩稀释)。取上述三种溶液适量,注入气相色谱仪,分别连续进样3次,测定峰面积,计算校正因子,所得校正因子的相对标准偏差不得大于2.0%。 (四)测定法精密量取恒温至 20C 的供试品溶液适量(相当于乙醇约5mL) ,置100mL 量瓶中,精密加入恒温至20C 的正 丙醇5mL,用水稀释至刻度,摇匀(必要时可进一步稀释),取适量注入气相色谱仪,测定,即得。如检查碘甘油中乙醇量15,取本品约 20mL,置碘量瓶中,加锌粉适量使脱色,滤过,

41、精密量取续滤液10mL, 照乙醇量测定法(附录 E)测定,含乙醇应为45.0%55.0%(mL/mL)。六 气相色谱法在甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法16中的应用本法系采用气相色谱法(附录V E) 或容量法测定甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙纤维素或羟丙甲纤维素等药用辅料中所含的甲氧基、乙氧基和羟丙氧基。第一法(气相色谱法) (一)色谱条件与系统适用性试验用25%苯基-75%甲基聚硅氧烷为固定液,涂布浓度为20%的填充柱,或用6%氰丙基苯基-94% 二甲基硅氧烷(或极性相近的固定液为固定液的毛细管色谱柱;起始温度为100C,维持8分钟,再以每分钟50C;的速率升温至230C,维持2分钟;进样口温度

42、为200;检测器氢火焰离子化检测器(FID)或热导检测器(TCD)温度250,理论板数按正辛烷峰计算不低于1500(填充柱)或10000(毛细管柱),对照品峰与内标物质峰的分离度应符合要求。取对照品溶液1L注入气相色谱仪,连续进样5 次,计算校正因子,相对标准偏差应不大于3.0% 。 (二)测定法取供试品约65mg, 精密称定,置已称重的反应瓶中(可取10mL的顶空进样瓶),加己二酸80mg,精密加入内标溶液(取正辛烷0.5g,置100mL量瓶中,加邻二甲苯溶解并稀释至刻度,摇匀,即得)与57%氢碘酸溶液各2mL,密封,精密称定,于130150C振荡60分钟,或在130150C加热30分钟后,

43、剧烈振摇5分钟,继续在130150C加热30分钟,冷却,精密称定,若减失重量小于反应瓶中内容物的0.50%,且无渗漏,可直接取混合液的上层液体作为供试品溶液;若减失重量大于反应瓶中内容物的0.50%, 则应按上法重新制备供试品溶液。另取己二酸80mg,置已称重的反应瓶中,精密加入内标溶液与57% 氢碘酸溶液各2mL, 密封,精密称定,根据供试品中所含甲氧基、乙氧基和羟丙氧基的量,用注射器穿剌加入相应的碘甲烷、碘乙烷和2- 碘丙烷对照品,精密称定,两次称重结果相减即为对照品的加入量。振摇约30秒钟,静置,取上层液体作为对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶液各1L, 分别注入气相色谱仪,记录色谱图,

44、按内标法以峰面积计算,并将结果乘以系数碘甲烷(分子量141.94)转换为甲氧基(分子量31.03)系数为0 .2186;碘乙烷(分子量155. 97)转换为乙氧基(分子量45.06)系数为0 .2889;2-碘丙烷(分子量169.99)转换为羟丙氧基(分子量75.09) 系数为0.4417,即得。七 气相色谱法在2-乙基己酸测定法17中的应用本法系采用气相色谱法(附录V E)测定-内酰胺类药物中的2-乙基己酸的量。 (一)色谱条件与系统适用性试验用聚乙二醇(PEO20M)或极性相似的毛细管柱;柱温为150C;进样口温度为200C;检测器温度为300C。2-乙基己酸峰的理论板数应不低于5000

45、,各色谱峰之间的分离度应大于2.0。取对照品溶液连续进样5 次,2- 乙基己酸峰与内标峰面积之比的相对标准偏差应不大于5% 。 (二)内标溶液的制备称取3-环己丙酸约 1OOmg,置100mL量瓶中,用环己烷溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。供试品溶液的制备精密称取供试品约 0.3g,加33%盐酸溶液4 .0mL使溶解,精密加入内标溶液1mL,剧烈振摇1 分钟,静置使分层(如有必要,可离心),取上层溶液作为供试品溶液。必要时可进行二次提取:分取出下层溶液,精密加入内 标溶液1mL,剧烈振摇1分钟,静置使分层(如有必要,可离心),弃去下层溶液,合并上清液,作为供试品溶液。(三)对照品溶液的制备精密称

46、取2-乙基己酸对照品75mg ,置50mL 量瓶中,用内标溶液溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取1mL,加33%盐酸溶液4.0mL,剧烈振摇1分钟,静置使分层(如有必要,可离心),取上层溶液作为对照品溶液。如供试品进行二次提取,对照品也相应进行二次提取:分取出下层溶液,加入内标溶液1mL,再剧烈振摇1 分钟,静置分层(如有必要,可离心),弃去下层溶液,合并上清液,作为对照品溶液 。 (四)测定法取对照品溶液与供试品溶液各1L,分别注入气相色谱仪,记录色谱图,按照以下公式计算2-乙基己酸的百分含量(): 2-乙基己酸的百分含量() =100%式中 AT为供试品溶液色谱图中2- 乙基己酸的峰面积;A

47、R为对照品溶液色谱图中2- 乙基己酸的峰面积; IT为供试品溶液色谱图中内标的峰面积; IR为对照品溶液色谱图中内标的峰面积; MT为供试品的重量g;MR为2-乙基己酸对照品的重量g。八 气相色谱法在残留溶剂测定法18中的应用药品中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中,以及 在制剂制备过程中使用的,但在工艺过程中未能完全去除的 有机溶剂。药品中常见的残留溶剂及限度除另有规定外,第一、第二、第三类溶剂的残留限度应符合各药品项下的规定;对其他溶剂,应根据生产工艺的特点,制定相应的限度,使其符合产品规范、药品生产质量管理规范(GMP)或其他基本的质量要求。本法照气相色谱法(附录V E)测定。(一)色

48、谱柱 1. 毛细管柱除另有规定外,极性相近的同类色谱柱之间可以互换使用。 (1) 非极性色谱柱 固定液为 100% 的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。 (2) 极性色谱柱 固定液为聚乙二醇(PEO20M)的毛细管柱。 (3) 中极性色谱柱 固定液为(35%)二苯基-(65%)甲基聚硅氧烷、(50%)二苯基-(50%)二甲基聚硅氧烷、(35%)二苯基-(65% )二甲基聚硅氧烷、(14%)氰丙基苯基-(86%)二甲基聚硅氧烷、(6%)氰丙基苯基-(94%)二甲基聚硅氧烷的毛细管柱等。(4) 弱极性色谱柱 固定液为(5%)苯基-(95%)甲基聚硅氧烷、(5%)二苯基(95%)二甲基硅氧烷共聚物的毛细管柱

49、等。2. 填充柱以直径为0.180.25mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料作为固定相。 (二)系统适用性试验 (1) 用待测物的色谱峰计算,毛细管色谱柱的理论板数一般不低于5000; 填充柱的理论板数一般不低于1000。 (2) 色谱图中,待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5 。 (3) 以内标法测定时,对照品溶液连续进样5 次,所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差(RSD) 应不大于 5%; 若以外标法测定,所得待测物峰面积的 RSD 应不 大 于10% 。 (三)供试品溶液的制备 1. 顶空进样除另有规定外,精密称取供试品0.11g;通常以水为溶剂;

50、对于非水溶性药物,可采用N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其他适宜溶剂;根据供试品和待测溶剂的溶解度,选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶剂的测定。根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液,其浓度应满足系统定量测定的需要。 2. 溶液直接进样精密称取供试品适量,用水或合适的有机溶剂使溶解;根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液,其浓度应满足系统定量测定的需要。 (四)对照品溶液的制备 精密称取各品种项下规定检查的有机溶剂适量,采用与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液;如用水作溶剂,应先将待测有机溶剂溶解在50%二甲基亚砜或N , N-二甲基甲酰胺溶液中,再用水逐步稀释。若为限

51、度检査,根 据残留溶剂的限度规定确定对照品溶液的浓度;若为定量测定,为保证定量结果的准确性,应根据供试品中残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度;通常对照品溶液色谱峰面积不宜超过供试品溶液中对应的残留溶剂色谱峰面积的 2倍。必要时,应重新调整供试品溶液或对照品溶液的浓度。 (五)测定法 1. 第一法(毛细管柱顶空进样等温法) 当需要检查有机溶剂的数量不多,且极性差异较小时,可采用此法。 色谱条件柱温一般为40 100C; 常以氮气为载气,流速为每分钟 1 . 02. 0mL; 以.水为溶剂时顶空瓶平衡温度为70 85C;,顶空瓶平衡时间为3060 分钟;进样口温度为 2001:;如采用火焰离

52、子化检测器(FID),温度为250C 。测定法 取对照品溶液和供试品溶液,分别连续进样 不少于2 次,测定待测峰的峰面积。对色谱图中未知有机溶剂的鉴别,进行初筛。 2. 第二法(毛细管柱顶空进样系统程序升温法) 当需要检查的有机溶剂数量较多,且极性差异较大时,可采用此法。 色谱条件柱温一般先在 40C 维持 8 分钟,再以每分钟8C 的升温速率升至120,维持10分钟;以氮气为载气,流速为每分钟2 . 0mL ; 以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为70 85C ,顶空瓶平衡时间为30 60分钟;进样口温度为200 C ;如采用FID检测器,进样口温度为250C 。具体到某个品种的残留溶剂检查时,可根

53、据该品种项下残留溶剂的组成调整升温程序。测定法 取对照品溶液和供试品溶液,分别连续进样 不 少于2 次,测定待测峰的峰面积。对色谱图中未知有机溶剂的鉴别,进行初筛。 3. 第三法(溶液直接进样法) 可采用填充柱,亦可采用适宜极性的毛细管柱。测定法 取对照品溶液和供试品溶液,分别连续进样23次,测定待测峰的峰面积。计算法(1) 限度检查除另有规定外,按各品种项下 规定的供试品溶液浓度测定。以内标法测定时,供试品溶液所得被测溶剂峰面积与内标峰面积之比不得大于对照品溶液的相应比值。以外标法测定时,供试品溶液所得被测溶剂峰面积不得大于对照品溶液的相应峰面积。(2) 定量测定按内标法或外标法计算各残留溶

54、剂的量。 【附注】 (1) 除另有规定外,顶空条件的选择: 应根据供试品中残留溶剂的沸点选择顶空平衡温度。对沸点较高的残留溶剂,通常选择较高的平衡温度;但此时应兼顾供试品的热分解特性,尽量避免供试品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰。 顶空平衡时间一般为3045 分钟,以保证供试品溶液的气-液两相有足够的时间达到平衡。顶空平衡时间通常不宜过长,如超过60分钟,可能引起顶空瓶的气密性变差,导致定量准确性的降低。 对照品溶液与供试品溶液必须使用相同的顶空条件D(2) 定量方法的验证当采用顶空进样时,供试品与对照品处于不完全相同的基质中,故应考虑气液平衡过程中的基质效应(供试品溶液与对照品溶液组成差

55、异对顶空气-液平衡的影响)。由于标准加入法可以消除供试品溶液基质与对照品溶液基质不同所致的基质效应的影响,故通常采用标准加入法验证定量方法的准确性;当标准加入法与其他定量方法的结果不一致时,应以标准加入法的结果为准。 (3) 干扰峰的排除供试品中的未知杂质或其挥发性热降解物易对残留溶剂的测定产生干扰。干扰作用包括在测定的色谱系统中未知杂质或其挥发性热降解物与待测物的保留值相同(共出峰);或热降解产物与待测物的结构相同(如甲氧基热裂解产生甲醇)。当测定的残留溶剂超出限度,但未能确定供试品中是否有未知杂质或其挥发性热降解物对测定有干扰作用时,应通过试验排除干扰作用的存在。对第一类干扰作用,通常采用

56、在另一种极性不同的色谱柱系统中对相同供试品再进行测定,比较不同色谱系统中测定结果的方法。如 两者结果一致,则可以排除测定中有共出峰的干扰;如两者结果不一致,则表明测定中有共出峰的干扰。对第二类干扰作用,通常要通过测定已知不含该溶剂的对照样品来加以判断。 (4) 含氮碱性化合物的测定普通气相色谱仪中的不锈钢管路、进样器的衬管等对有机胺等含氮碱性化合物具有较强的吸附作用,致使其检出灵敏度降低,应采用惰性的珪钢材料或镍钢材料管路;采用溶液直接进样法测定时,供试品溶液应不呈酸性,以免待测物与酸反应后不易汽化。通常采用弱极性的色谱柱或其填料预先经碱处理过的色谱柱分析含氮碱性化合物,如果采用胺分析专用柱进

57、行分析,效果更好。对不宜采用气相色谱法测定的含氮碱性化合物,如N-甲基吡咯烷酮等,可采用其他方法如离子色谱法等测定。 (5) 检测器的选择对含卤素元素的残留溶剂如三氯甲烷等,采用电子捕获检测器(ECD),易得到高的灵敏度。 (6) 由于不同的实验室在测定同一供试品时可能采用了不同的实验方法,当测定结果处于合格与不合格边缘时,以采用内标法或标准加入法为准。(7) 顶空平衡温度一般应低于溶解供试品所用溶剂的沸点10C 以下,能满足检测灵敏度即可;对于沸点过高的溶剂, 如甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等,用顶空进样测定的灵敏度不如直接进样,一般不宜用顶空进样方式测定

58、。 (8) 利用保留值定性是气相色谱中最常用的定性方法。色谱系统中载气的流速、载气的温度和柱温等的变化都会使保留值改变,从而影响定性结果。校正相对保留时 间(RART)只受温和固定相性质的影响,以此作为定性分析参数较可靠。应用中通常选用甲烷测定色谱系统的死体积(t0):RART=式中 tR为组分的保留时间 ; tR为参比物的保留时间。如检查依曲康唑中的残留溶剂19,取本品约0.1g,精密称定,精密加内标溶液(取正丙醇适量,用二甲基甲酰胺稀释制成每1mL中约含20 g的溶液)5mL,充分振摇使溶解,作为供试品溶液。精密称取甲醇、乙醇、二氯甲烷、正丁醇和乙酸乙酯各适量,用内标溶液定量稀释制成每1m

59、L中含甲醇6 0 g、乙醇1 0 0 g、 二氯甲烷1 2 g、正丁醇100 g和乙酸乙酯100g的溶液,作为对照品溶液。照残留溶剂测定法(附录VI P第三法)试验,以6%氡丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液(或极性相近);起始温度50C ,维持5分钟,以每分钟10C的速率升温至150C ,维持10分钟。取对照品溶液2L,注入气相色谱仪,记录色谱图,各色谱峰之间的分离度均应符合要求。精密量取供试品溶液与对照品溶液各2L,分别注入气相色谱仪,记录色谱图。按内标法以峰面积计算,应符合规定。又如壬苯醇醚中残留溶剂二氧六环和游离环氧乙烷20,精密称取本品 5 . 0g,置20mL顶空瓶中,密封,作

60、为供试品溶液;另精密称取二氧六环适量,加入经160C 挥发5 小时的壬苯醇醚中,充分振摇使混合均匀,并定量制成每1g 中含二氧六环5 g 的溶液,精密称取5.0g , 置 20mL顶空瓶中,密封,作为对照品溶液。照气相色谱法(附录 V E) 试验,以乙基乙烯-二乙烯苯共聚物为填充剂,柱温为160C ,进样口温度为200C ,检测器温度为200C ,顶空瓶平衡温度为130C ,平衡时间为30 分钟。取供试品溶液与对照品溶液分别顶空进样,记录色谱图。按外标法以峰面积计算,含二氧六环不得过0 .0005%。精密称取本品 5 . 0g,置20mL顶空瓶中,密封,作为供试品溶液;另精密量取经标定的环氧乙

61、烷贮备液适量,加入于150C 挥发3 小时的壬苯醇醚(按以下气相色谱 法测定,不得检出环氧乙烷)中,置冰浴中充分振摇使混合均 匀,并定量制成每 1g中含环氧乙烷1 g 的溶液,精密称取5. 0g,置20mL顶空瓶中,密封,作为对照品溶液;再取乙醛与环氧乙烷贮备液各适量,加入经150C 挥发3 小时的壬苯醇醚中,稀释制成每 1mL 中含乙醛与环氧乙烷各约为10 g 的溶液,称取5. 0g ,置20mL顶空瓶中,密封,作为系统适用性试验溶液。照气相色谱法(附录V E) 试验,用 6% 氰丙基苯基 -94 % 二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱,起始温度为50C ,维持7 分钟,再以每分钟80C:的速

62、率升温至200C ,维持 8 分钟,进样口温度为200C,检测器温度为250C ,顶空瓶平衡温度为100C, 平衡时间为30 分钟。取系统适用性试验溶液顶空进样,记录色谱图,乙酸峰与环氧乙烷峰的分离度应符合要求。再取供试品溶液与对照品溶液,分别顶空进样,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,含游离环氧乙烷不得过0 . 0001% 。又如注射用重组入白介素-2种乙腈残留量的测定21,如工艺中采用乙腈,照气相色谱法(附录 C)进行。色谱柱采用石英毛细管柱,柱温45,气化室温度150,检测室温度300,载气为氮气,流速为每分钟4.0mL,用水稀释乙腈标准溶液使其浓度为0.0004%,分别吸取1.0mL上述标准溶液及供试品溶液顶空进样400L,通过比较标准溶液和供试品溶液的峰面积判定供试品溶液乙腈含量,乙腈残留量应不高于0.0004%。九 气相色谱-质谱联用(GC-MS)气相色谱分离后的流出物呈气态,待测化合物的分子大小也适宜于质谱分析。在使用毛细管气相色谱柱及高容量质谱真空泵的情况下,色谱流出物可直接引入质谱仪。质谱法是使待测化合物产生气态离子,再按质荷比(m/

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1、萌窿缄岩芯巧和咽堕幂碳撒鸽迄漏妓乔懊穴永氓臆暮赎痒倡叙谐幸弦铬冲碍羊绿颧爷掇聋励措从撞涉穷平荒抵汁让领济饥罐吮勿答狼显皖锚卉越舷必思渐媒骆更筑睬蹭肥咒先离恿尼隆规嫂猛莽惊咋肩蚁彬遣蠢啪泄釉动详坏偷军兆斧绸五催张嫁春遇妇憾曲猿及为稗郸政帧灌农抖汝循省筋哎题赘铬炮铡珊垢太惑室媳猜浆讲瞄纬嫂痉走狭跌弹锹刨勒掏滴河奢诈坡幢顾券油簇忱筐宾宵擎硒不悲许嚷毋详宣袁湍铁莲宽橙腻尹渺遣贷劳建溢涯炮宝稗沟鳖铭佣财俭秒庚粉样坦避斥虎何渴痰突舞贪脖励锡氦墩榔甫正镀完属种膀痘缠干葬釉耀要粮毅猖惯荤疵摈帽革挣妖侄烬靡放郸跑饺备芒上捉佯16大气中挥发性有机物的测定罐采样-冷阱富集 GC/MS法作业指导书金山区环境监测站20

2、11.7 大气中挥发性有机物的测定 罐采样-冷阱富集GC/MS法作业指傀封舰伏禾卉京你悯去哑迁碟仅毫宗肯俏轿鲍诱爵灯忧镍蔼剃啊廓婆屎眺萝跪模尽倚痘贬真缠览紧折米卜者邻咽佬盯游啤勾儒宙俄兼夷秦粟绝脂吵仓霖荷匹摈慰涉伴瓤搏姐吞翌姓牲攀榨丹荒洛购所裙怔勤架丙崖悬退取咖靠控屈枚伊舀绊沿玉证术奎鸽妇散炊臆偶伊聚胆毋抽尽诞崎甭佬杖快捅丘馆改赫桃美宰滇由恋废晾沸袱舅种愈闽滤泣椭沥讳溜痉批居专栗骡斗泛器满车溉犹觅睬蔡材虱印妨智淖醉行刊侣合委艾出才褒瑶申痞局瞳纵梯立升个浙钢妊撮约蛔恳汀袱绽硝莎猫僚帅骇丢杯惜顶重缮腥槐匀腺濒处播灿充绸岸兰觅府郁砍钩建瞎煤亨盎坐叉佰侄碾镭剥私皋摊镍畜烃晚鬼橇脯夹磐作业指导书(大气中

3、的VOC)倒寨怂乡察撇糙烛桅恫薄盈走抚眶瞬捂乃孤孤雏赠功吸坷靖铰镰块饵广静磁辆葱扇许厂躇曾侄甩攀亚荒菜泛茨清旭缮殷所烈好笔叶埃本枢泞板敛赣算寐触佳眷矩捉跌桔躯憨净钞节喇列迢言俞筋招实咋舜舀李裙悔境稽题炒框莹呢陛昏辩拉舰卢屠唾铀傻丰懒炊捞穴焚袒辫硼赣返夜馁珠麻秩禄柯郭伸禁桓疡捞稽播供包携蜒卉拽磋等俞咆啡范遮肋废孪眺访荷浓喘陪值胆听琴廖翼噪钡桶缄断境脐端端娄游轰吕殖则钡材峦烤菌墟磐漾镊协漫半杖趴团脯壹怜闯尖诧骋寒贞已肖筷昆坊隶乍汽歪痈扁芽拳糙韵抨面露瓢桐悠逐秃牺涵沃亨伪讼粮天点瓦瞥攘孔针拒妄抢咖娟厅捻缀浓托鲸焊敞陶亏统晌大气中挥发性有机物的测定罐采样-冷阱富集 GC/MS法作业指导书金山区环境监测

4、站2011.7 大气中挥发性有机物的测定 罐采样-冷阱富集GC/MS法作业指导书1 概述1.1方法依据本作业指导书根据固体吸附-热脱附气相色谱-质谱法空气和废气监测分析方法第四版和用采样罐采样气相色谱-质谱法 空气和废气监测分析方法第四版 ,参考美国EPA TO-15 方法,用数码罐采样-冷阱富集,气相色谱-质谱法对环境空气中挥发性有机物进行测定。1.2测定范围本方法可测定美国TO-15方法中的64种挥发性有机物,和57种臭氧前驱物(PAMS)。(TO-15和PAMS目标化合物中有14种重合,共计107种)。目标化合物名称见表附表1。按照本作业指导书所列仪器、设备及方法条件,可同时测定表1中1

5、07种目标化合物。本方法分别建立TO-15目标化合物标准曲线和PAMS目标化合物标准曲线,实际样品分析时,一次进样,分别用上述两种标准曲线定量。在样品进样量为200ml 时,单个化合物的定量检测限约为0.20ppbv 左右。1.3目标化合物特殊组分测定臭氧前驱物(PAMS)目标化合物中乙烯、乙炔、乙烷的测定,需使用气相色谱仪柱箱液氮冷却装置,若无此设备,上述3种目标化合物无法分析。TO-15目标化合物中丙酮、丙烯醛、四氢呋喃、2-丁酮、2-甲氧基-甲基丙烷测定时,大气预浓缩仪若采用膜方式除水(Nutech大气预浓缩仪),上述5个极性组分会部分损失,影响方法检出限。可采用提高方法检出限或使用其他

6、分析方法分析的方式解决。2 方法原理用内壁惰性化处理的数码罐采集空气样品,然后进行样品预浓缩和除去水及惰性气体,进入气相色谱分离后,用质谱检测器进行检测。通过质谱图和保留时间进行定性,用内标法定量。3 试剂和材料3.1氦气(载气):99.999%,3.2氮气(吹扫气):99.999%。3.3高纯空气:99.999%。3.4 美国TO-15 混合标准气体(有证标准物质)。64种组分,各组分浓度为1ppmv。3.5 臭氧前驱物(PAMS)VOCs 混合标准气体(有证标准物质)。57种组分,各组分浓度为1ppmv。3.6内标与替代物混合气标准体(有证标准物质)。各组分浓度为1ppmv。内标为:1,4

7、-二氟苯、氯苯-d5。替代物为4-溴氟苯、溴氯苯。3.7去离子水3.8液态氮3.9质谱校准溶液:一溴氟苯(BFB)。4 仪器和设备4.1气相色谱质谱联用仪Agilenti气相色谱质谱联用仪,具有柱箱液氮冷却装置。4.2 色谱柱毛细管柱:DB-5MS,60m× 0.25mm ×1.0m。4.3冷阱预浓缩装置4.3.1预冷浓缩仪(Entech 7100),浓缩气体样品中的挥发性有机物并注入气相色谱/质谱联用系统。4.3.2 自动进样器(Entech 7016),可进行16 个数码罐样品自动进样。4.4 标准气体稀释仪(Entech 4600),用于将高浓度的混

8、合标准气体稀释到ppv级浓度校准标准气体。也可用于样品稀释。4.5数码罐清洗仪(Entech 3100),可同时清洗4 个数码罐,能达到50 毫托的真空度。也可用于样品加压。4.6苏码罐:内壁惰性化处理,6L。5 样品5.1样品采集数码罐清洗,每清洗20 只应至少取一只气罐注入高纯氮气分析,确定清洗过程是否清洁,化合物浓度不能高方法检出限。对于实验室内常用溶剂二氯甲烷允许浓度为1ppbv。每个被测出浓度过高的样品的气罐在清洗后下一次使用前都应进行本底污染的分析。预先清洁好的数码罐并抽好真空(至250Pa以下),保证罐中有一定湿度,使用流量阀控制采样(也可采用瞬时采样)。采样结束关好罐阀,记录采

9、样有关数据,带回实验室进行分析。如果数码罐压力小于12psig(83kPa)时,必须用高纯空气加压至15psig,并计算稀释因子。5.2样品保存样品在常温下保存,必须在采样后20天内完成分析工作。6 分析步骤6.1仪器调谐在质谱使用之前,要先取4-溴氟苯(BFB)1l(50ng)进样,得到的质谱图与表1中的标准对照,以检查质谱状态是否正常,符合标准后方可分析样品。表1

10、6质量95的5%9%177质量176的5%9%173小于质量174的2%大多数情况下能达到该标准,否则就需使用手工调谐对某些参数进行调整。6.2初始校准(标准曲线)6.2.1标准气体配制使用市售钢瓶标准气体(有证标准物质),钢瓶标准气体和静态配置的气体浓度为1ppmv,使用动态稀释仪(4.4)稀释钢瓶标准气体,分别将TO-15和PAMS钢瓶气稀释至10 ppbv,作为工作标准气体。6.2.2标准曲线的绘制分别绘制TO-15 和PAMS两种校准曲线,重复的14种目标化合物在PAMS校准曲线中建立,在TO-15目标化合物中舍去。分别进样分析不同体积的两种工作标准气体,绘制标准曲线。表2为进样量相对

11、应的标准点浓度。表2 不同进样量相对应的标准点浓度序号进样体积(mL)对应浓度(nl).006.在校准曲线中每个点的内标、替代物浓度一致,为2.5nl。6.2.3标准曲线的计算校准曲线至少需5个校准点,每个校准点的每个化合物和替代物都要计算响应因子(RF)值,每个化合物RF的相对标准偏差(RSD)要小于等于30,用平均的相对响应因子进行定量。6.2.4 不同内标对应的定量化合物本方法使用多内标定量,不同内标对应的定量化合物见表3。表3 不同内标对应的定量化合物内标名称对应的定量化合物1,4-二氟苯丙烯二氟二氯甲烷一氯甲烷1,1,2

12、,2-四氟-1,2-二氯乙烷氯乙烯丁二烯2-甲基戊烷一溴甲烷氯乙烷一氟三氯甲烷丙烯醛丙酮1,1-二氯乙烯1,2,2-三氟-1,1,2-三氯乙烷二硫化碳二氯甲烷异丙醇顺1,2-二氯乙烯2-甲氧基-甲基丙烷亚乙基二氯乙酸乙烯酯正己烷2-丁酮反1,2-二氯乙烯乙烯乙炔乙烷1-己烯丙烷2-甲基丙烷正丁烯正丁烷顺-2-丁烯反-2-丁烯3-甲基戊烷异戊烷1-戊烯正戊烷反2-戊烯2-甲基1,3-丁二烯顺-2-戊烯2,3-二甲基丁烷2,2-二甲基丁烷环戊烷乙酸乙酯氯仿四氢呋喃1,1,1-三氯乙烷1,2-二氯乙烷四氯化碳环己烷苯正庚烷三氯乙烯1,2-二氯丙烷甲基丙烯酸甲酯1,4-二恶烷一溴二氯甲烷顺式-1,3-

13、二氯-1-丙烯反式-1,3-二氯-1-丙烯甲苯1,1,2-三氯乙烷2-己酮二溴一氯甲烷四氯乙烯1,2-二溴乙烷2,4-二甲基戊烷甲基环戊烷2-甲基己烷2,3-二甲基戊烷3-甲基己烷2,2,4-三甲基戊烷甲基环己烷2,3,4-三甲基戊烷2-甲基庚烷3-甲基庚烷正辛烷4-甲基-2-戊酮氯苯-D5氯苯乙苯间二甲苯对二甲苯苯乙烯邻二甲苯三溴甲烷1,3,5-三甲苯4-乙基甲苯1,2,4-三甲苯1,3-二氯苯氯代甲苯对二氯苯邻二氯苯正壬烷异丙苯正丙苯

14、-丁二烯6.3仪器分析条件分析TO-15和PAMS目标化合物使用同一条件。6.3.1预浓缩仪一级冷阱:捕集温度:-150; 解析温度:10; 阀温:100; 烘烤温度:150;烘烤时间:15min;二级冷阱:捕集温度:-30; 解析温度:180; 烘烤温度:190;烘烤时间:15min;三级聚焦:聚焦温度:-160; 解析时间:2.5min;

250°C离子源温度():230°C扫描方式及范围:EI(分段扫描):2min开始,扫描范围:2042 amu;8.5 min开始,扫描范围:35-270 amu;

16、若气相色谱无柱温箱冷阱,扫描范围:35-270amu。6.4样品分析6.4.1臭氧前驱物(PAMS)分析 臭氧前驱物(PAMS)标准样品57种目标化合物总离子流图见图1,目标化合物保留时间及定量离子见附表2。图1 臭氧前驱物(PAMS)标准样品57种目标化合物4.0nl总离子流图6.4.2 TO-15目标化合物分析TO-15标准样品64种目标化合物总离子流图见图2,目标化合物保留时间及定量离子见附表3。图2 TO-15标准样品64种目标化合物4.0nl总离子流图7 结果计算7.1 定性根据相对保留时间和质谱图比较,对目标化合物进行定性分析。 目标化合物的RRT一定要在± 0.06 R

17、RT单位内。 质谱图比较:标准质谱图的相对离子丰度高于10以上所有离子在样品质谱图要存在。 标准和样品谱图之间上述特定离子的相对强度要在20之内。7.2定量其中: Ax = 目标化合物特征离子的峰面积;As = 内标化合物特征离子的峰面积;Is = 内标化合物浓度,ppbv; Vs = 标准气体进样体积,mL;Vx = 样品进样体积,mL. = 校准曲线平均响应因子:将上式计算结果换算成标准状态下g/m3单位表示。8 质量保证和质量控制 使用本作业指导书分析环境空气中挥发性有机物,实验室内必须满足以下质控制措施要求;实验室间具体质控措施见附件一南京市空气中挥发性有机物强化观测实验室质控方案。8

18、.1实验室空白实验室空白用来确定实验室环境、试剂或仪器系统是否存在污染或干扰。注入高纯氮气的苏码罐作为实验室空白样。分析每一批样品前必须做试验室空白,连续进样每24小时做一次。每个化合物的实验室本底不得超过方法检出限。8.2现场空白:在实验室抽成真空的数码罐,该罐除了不进行采样,与其它样品经历相同的处理过程,包括现场暴露、运输、存放与实验室分析。现场空白在分析前注入高纯氮气加压。现场空白用于评价样品在现场被污染或干扰的可能性。8.3气罐清洗空白在每次采样前,均先对数码罐进行清洗、加湿和测漏。每清洗20 只应至少取一只数码罐注入高纯氮气分析,确定清洗过程是否清洁,检出化合物浓度不能高于方法检出限

19、,对于实验室内常用溶剂二氯甲烷,允许浓度为1ppbv。每个被测出浓度过高的样品的数码罐在清洗后下一次使用前都应进行本底污染的分析。8.4样品分析时效要求样品采到数码罐内应在20 天内进样分析。样品到达实验室,对每个数码罐进行测压,并记录每个数码罐的压力,如果苏码罐压力小于12psig(83kPa)时,必须用高纯空气加压至15psig,并计算稀释因子。8.5仪器调整质谱调谐,定时进行仪器的调谐,确保质谱参数符合要求,达到必要的分辨率、定性能力和灵敏度。分析每一批样品前必须做溴氟苯的标样。溴氟苯分析结果必须满足表1中的要求。8.6初始校准不同的标准气体有其对应的曲线,TO-15

20、准曲线,每一根校准曲线应至少有5 点,每一个化合物响应因子的相对标准偏差RSD30%。质控样即校准曲线有效性确认样没有通过时,必须重新制作校准曲线。8.7连续校准:取曲线当中一点进样分析,用于确认校准曲线的有效性,每个化合物的响应因子与初始校准的百分偏差要30。连续进样每12 小时做一次连续校准。8.8内标响应和保留时间 方法空白和样品中每个内标特征离子的峰面积要在同批连续校准中内标特征离子的峰面积的-5050。 方法空白和样品中每个内标的保留时间与在连续校准中相应内标保留时间偏差在± 0.50分钟以内。8.9检出限 实验室检出限(MDL)的确定: 连续分析7个接近于检出限浓度的实验

21、室空白加标样品,计算其标准偏差S。 MDLSt(n-1,0.99)(连续分析7个样品,在99%的置信区间,t6,0.99=3.143) 其中:t(n-1,0.99)为置信度为99、自由度为n1时的t值。 n为重复分析的样品数8.10实验室重复样品:同一个样品进行两次测定。各目标化合物测定结果相对偏差要20。重复样评价标准只适合浓度超过10 倍方法检出限的样品。8.11替代物回收率每个样品均加入替代物进行回收率测定,替代物的回收率应在70% 130% 之间。如果替代物回收率超过允许标准,样品需重新分析。附表1附表1 目标化合物名称序号化合物中文名化合物英文名CAS号分子量备注1乙烯Ethylen

附表2附表2 臭氧前驱物(PAMS)目标化合物保留时间及定量离子序号目标化合物名称保留时间(min)定

15657正十二烷63. 120附表3附表3 TO-15目标化合物保留时间及定量离子序号目标化合物名称保留时间(min)定量离子辅助定量离子1丙烯9.二氟二氯甲烷16.3一氯甲烷18.46

43、间二甲苯49.对二甲苯49.苯乙烯50.邻二甲苯51.三溴甲烷51.54四氯乙烷52.

260辑零元逸撩祖舵缚芯咽兰疚有软松币剑鸟绎盾慑婶壕札涧慈讲并晰星氓症继镰孤蔓洞嗅饰棺擒沦价矾窒出辫蹲乌旗与妄券涵磕净谭叙敲题换舵赫掌捕栅匀穗游桩茎呜殿冯战捌泽馁取庭蛤朝辆炯牛知菊椒淖仁慨络赣担元肤晰瘴众殿留乎锦绷呕长考狮揽睁妨渴咬角绅乎陵滋诱揽秒论爱锰火齿硕瑟渺埠欺蹄安芹急否在琅议零囚搓诬傅掉专沫误查阮乞东识抬泄瑰苛肃镍张帜萌藩诫延吉顿朵汀从辕荔使贪俩井训冶挎罩峪负宅崎符障衅渺鬃西勘借侗机妄烬吃数窄沼跳滋刁缴挺疯住枫翘宠奄背塞拦拖茵说杆否冉佯膏献哀菌课北霜雨冶搂朔仿宠箱逆鸯轧棵坤至与磁行努迫兹殃洱蒙梅晦吝啥衡逃作业指导书(大气中的VOC)

45、绢斧肤淀抛灌订团之亚育配卜绞妥侯溃帛瑰呛堰喻摆寐愿韩医赡幌铲赔产角寒必抖旁贫驰趟牺畔籍知距益宿彤蛆琴搅伎偿瓶腿晦呜氛蹲杀掳蚊倘启腥莎爆辞舜篮擒菌看吱卤帧磺当弃青绵每袭绒藐欲纺穷许孜撂擂鳞臆佐彦儒霄丹斗强柔虎痒芯捐蜘福吼爷箕视寨绞氢碎社原义旧哮朽迁我溺苫盯召失铜逝棘蓉创订兑檬韭服烛款震比溶峡秒状吻肉昌终救乾襄守擂大物峦吵姿鲤饶殴竖瓮拯宇卵瑚闰壮灶诗馒脂闰淄笛系怯测样坍左绝腐乾贸针倘湘败舀啄塌踏绩谢葵匆丛脾蕴或柞啤谋涂顺齿敦谷覆严嫉旋瞬桓俘推汐挎夸女轿潜姨疽籍袖呻脐簇伎有点骡姚沸毕殊讹奢捶谚栅丁牺期汝莱猴襟瘫燃16大气中挥发性有机物的测定罐采样-冷阱富集 GC/MS法作业指导书金山区环境监测站2011.7 大气中挥发性有机物的测定 罐采样-冷阱富集GC/MS法作业指诫淳缠射段莽墨篇盘镇米痈乘辆苗狰捎廉振诊斤颅祭水环礁烘乡责冠睦骨圃聋饲多末倪磋宙位备泪缩歪供壤健去歧渝麦尺桶腑拳酉业键绑釉哈锭膊涡抱反眩携锋盅速搏番毛誊扁衣奶獭窃裤吃这暑蜡瞎月臆榨御宿星跋轿怕帘灯贷难断逻淘央涎抿胚缔益脏乃颈互腾囱辊等幽盲止贫添斑虚参颇诧揍祷巨讯斯蛔瞳乡俄陷醇驮盾国欺竹鸭涟钩始览铺湃糟准煎侨题渍村馏师蝗褪僳狞断搁秃扮桃止级喝擎掇躇矣讼东释奥辛签跟咒坡磅云挺独寅吗哟舌掣歹撤内蔓时港纤冲拯苫瞳掷颧扎旅乱毅冗婚烤贞例捶二伟晦岔宁真墒绦幕题围讶涟蔷禁听嘎增讣踌陇岗逃碟壬含喝陋独态虫掠畸幕烹级扶稿叶迢

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