lysowire tracker怎么用DND-189 、 DND-26这两种有什么区别呀

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2021-01-14 07:37 标签： wire tracker怎么用

  • LysoSensor?系列探针是主要对活细胞中的酸性区室（如溶酶体、顶体精子）动态合成和功能进行研究的一类荧光探针该类探针的染色具有向酸性，可通过质子化作用在酸性细胞器内累积该类探针的这种质子化作用还可解除染料的荧光淬灭性，使其所发射的荧光强度更强因此，与Lysowire tracker怎么用系列探针相比LysoSensor?系列探针随着细胞器的酸化程度其荧光强度呈pH依赖型(向酸)增强。

    本品LysoSensor? Green DND-189具有较低的pKa值仅在酸性区室内才具有荧光。本品以溶于无水DMSO的1 mM储存液形式提供

    如对活细胞中的酸性区室进行选择性标记和染色，可选择Lysowire tracker怎么用?系列探针。

    冰袋运输-20℃避光干燥保存，避免反复冻融有效期6个月。

    1）不能储存在无霜冰箱建议按照单次用量分装于-20℃冻存。

    2）为了您的安全和健康请穿实验服并戴一次性手套操作。

    使用前先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

    利用培养基或合适的缓冲液将1 mM 储存液稀释至工作浓度推荐工作液浓度至少为1 ?M；

    【注1】：为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度2）若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象

    【注2】：工作液现配现用。

    1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上加入合适培养基，使其爬片生长

    2）待细胞生長到合适丰度，吸除培养液加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30 min～2 h（具体孵育时间需根据细胞类型而定）

    3）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。若染色不够充分建议增加染料浓度或延长染色时间。

    2）利用37℃预热的探針工作液重悬细胞于生长状态下孵育30 min～2 h（具体时间需根据细胞类型而定）。

    3）离心吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞

    4）置于荧咣镜下观察。若染色不够充分建议增加染料浓度或加长染色时间。

    【注】：对于悬浮细胞也可将细胞贴附于经BD Cell-Tak处理过的盖玻片上，然後使用类似于贴壁细胞的方法进行染色

系列探针是对活细胞中的酸性区室进行选择性染色的一类荧光染料该类探针具有几大重要的特点，1）选择性标记酸性细胞器；2）纳摩尔级（nM）浓度即可有效标记活细胞；3）具有多色探针提供可根据情况对样品进行多标实验。Lysowire tracker怎么用

结构上由一个荧光基团和相连的弱碱基构成可自由穿过细胞膜，一般聚集在球形细胞器上适用于观察溶酶体内部生物合成及相关发病机理。Lysowire tracker怎么用中性pH下仅仅发生部分质子化因此该探针标记细胞器的原悝可能与其完全质子化并滞留在细胞器膜上有关。

 Green DND-26为绿色荧光标记的溶酶体探针具有504/511nm的最大激发/发射波长。本品以溶于无水DMSO的1mM储存液形式提供

Lysowire tracker怎么用 Green DND-26 溶酶体绿色荧光探针运输和保存方法室温运输。-20℃避光保存避免反复冻融。

注意事项为了您的安全和健康请穿实验服並戴一次性手套操作。

使用方法使用前先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底最佳工作浓度需根据不同的實验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

1）为了降低探针加载过度可能引起的假阳性建议在不影响染色效果的情况下盡量使用低浓度。2）若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。

2）待细胞生长到合适丰喥吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液于生长状态下孵育30min～2h（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。【

】：对Lysowire tracker怎么用 Green DND-26内化过程的动力学研究表明活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应Alkalizing effect”也就是说过长孵育时间会诱導溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1-5min才可用作pH指示剂

3）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。若染色不够充分建议增加染料浓度或延长染色时间。

2.2 对于悬浮细胞1）离心吸除上清。

2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞于生長状态下孵育30min～2h（具体时间需根据细胞类型而定）。

3）离心吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞

4）置于荧光镜下观察。若染色不够充分建议增加染料浓度或加长染色时间。

】：对于悬浮细胞也可将细胞贴附于经BD Cell-Tak处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法進行染色


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