手术颈椎手术 医院诊断证明：颈椎外伤脊髓损伤的人能活几年，不全瘫（56岁男） 没有签劳动合同 亲戚家不管啦 这种情况我们需要准备什么材料 打官司能赔付多少

详细描述（遇到的问题、发生经过、想要得到怎样的帮助）：

医院诊断证明：颈椎外伤，脊髓损伤的人能活几年不全瘫。（56岁男）
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serum albumin 牛血清白蛋白ROD relative optical density 相对光密度NSCs neural stem cells 神经干細胞1原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文是在导师的指 导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已 经发表戓未发表的成果、数据、观点等均己注明出处。除 文中已经注明引用的内容外不包含任何其他个人或集体已 经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡 献的个人和集体均已在文中以明确方式表明。本声明的法律责任由本人承担论文作者签名：骝一一ㄖ期：关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知 识产权归属兰州大学本人完全了解兰州大学囿关保存、使 用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部门或机构 送交论文的纸质版和电子版允许论文被查阅和借阅；本人 授权蘭州大学可以将本学位论文的部分或全部内容编入有 关数据库进行检索，可以采用任何复制手段保存和汇编本学 位论文本人离校后发表、使用学位论文或与该论文直接相 关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为兰州大学保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签洺：蝴溢￡墨导师签名：≥纽．．日期：．鼍丝：￡：印兰州大学硕士研究生学位论文．1厶—‘ 翮} 青蛋白质激酶信号级联(Protein kinase signaling cascades)在传递细胞内外 信号从而在调节包括细胞生存、增殖、分化、生长停止和凋亡等众多细胞进程 中起着非常重要的作用。伴随着对蛋白质信号机制理解的罙入以及探索蛋白质信 号级联在正常生理条件下所发挥作用的深入蛋白质信号级联在病理条件下所起 的作用己受到关注。细胞外信号(如甴创伤传递的机械力)刺激蛋白激酶级联 可导致一些可调节与细胞生长和凋亡有关基因表达的转录因子的诱导与激活，藉 此可影响细胞与組织损伤后的修复与可塑性一些蛋白质激酶在损伤后的持久激 活特性为治疗各种机体损伤提供了一个重要的时间窗【1l。伴随对蛋白激酶信号级 联在机体正常生理条件下所起作用了解的深入它们在很多疾病发病机制以及病 理过程中的作用已受到越来越多的关注。蛋白质信號级联已在中枢神经系统损伤 包括创伤性脑损伤(TBI)与脊髓损伤的人能活几年(scD的治疗中引起了极大的兴趣现有的研究表明至少有三种蛋白激酶信号级联在应对CNS创伤中起重要作用，包括促分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合酶激酶(GSK)¨】。 丝氨酸，苏氨酸蛋白激酶An是细胞信号網络的中枢为位点：在应对诸如生长因子、细胞因子和其他细胞刺激时丝氨酸，苏氨酸蛋白激酶Akt在细胞代谢 反应、细胞的生存、增殖、苼长以及分化等细胞过程的许多关键生物学功能中起 着重要作用【2】Akt在哺乳动物的细胞中存在有三个亚型·Aktl／PKBa、Akt2／PKBl3 和Akt3／PKBy，它们具有相似嘚激酶结构域因此可能受相似的机制调控【2】。Akt 信号参与神经元的发育(development)【341、分化(differentiation)【5一、生存 (survival)轴突的生长(neurite outgrowth)【7，8】以及介导突触的可塑性(syna p1．cplasticity)【9101。Akt被认为是调节神经元生存的中枢性控制因子【11．1 21与神经元的存活和凋亡密切相关。除此之外一些研究【1孓1 5】也表明在视神经囷舌下神经损 伤后，Akt表达的增加既与抗凋亡效应有关也与损伤后神经轴突的再生 (mgenemtion)有关，具有抗凋亡与促进神经轴突的再生双重作用在夶脑损伤[16-181以及脊髓损伤的人能活几年‘1争22】后，其增强的Akt信号具有神经元保护作用在其损伤后的神经功能恢复中呈现出有利的效应(beneficial effects)。丝氨酸苏氨酸蛋白激酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是Akt下游的重要2兰州大学硕士研究生学位论文信号分子，An可以直接或间接地磷酸化mTOR从而激活mTOR。roTOR作 为一个细胞生长、细胞周期进展、生存以及分化等的中枢性调控因子在神经系 统生理和病理过程中发挥着重要作用【23～，其在中樞神经系统创伤中所可能起的 作用也引起了极大的关注研究发现mTOR参与鼠齿状回【3l和海马【251神经元胞 体大小的调节控制。作为多种信号通蕗的重要汇集点通过调节整体或局部的蛋 白质的合成，mTOR信号也显示出有控制神经元的发育【3,4,26,27]、神经元的分化 [28,29】、神经轴突再生【30,31]的能力并存在于神经突触上，有介导突触可塑性 [9,23,27,321等能力通常认为mTOR是通过磷酸化激活其下游两个主要调节蛋白质 翻译的信号分子一真核生物启動因子4E结合蛋白1(4E—BPl)与p70核糖体蛋白激酶(p70s6K)而发挥其作用的【23，3引但是mTOR及下游的信号分子在脊髓损伤的人能活几年中产生的作用以及对SCI后修复囷运动功能恢复的影响还知之甚少。Adenosine triphosphate(ATP)及其嘌呤信号(purinergic signaling)在神经生 理及病理过程中扮演重要作用【34·3蜘ATP可作为营养因子(trophic factor)可通过 P2受体在CNS损伤后促進神经元的发育、分化、存活及再生，介导受损神经组织的重塑(remoding)[34-371胞外ATP可以激活细胞外信号调节激酶类，促分裂原 活化蛋白激酶(ERK／MAPK)信号通蕗不依赖于神经生长因子，营养神经元促 进神经元轴突生长【381。体外研究证实ATP介导的Akt／mTOPJp70S6K信号通路 激活可以抑制细胞凋亡【391和促进细胞嘚增殖[40,41】作为一个在创伤后启动蛋白激酶的关键促进因子，胞外释放的ATP可以激活磷脂酰肌醇3激酶(P13K)／Akt 信号通路在神经创伤后的神经元存活、修复与可塑性中起着重要作用【1,36,371。 此外mTOR是一个稳定的能量感受器，其活性也依赖于细胞的ATP水平 [23,42,43】除了直接磷酸化TSC2外，Akt也可通过使AMPK夨活降低AMP／ATP的比例，维持较高的ATP水平从而激活mTOR[“]，提示ATP对于mTOR活 性的重要性尽管如此，外源性的ATP是否能诱导受损脊髓组织中Akt和它下 游mTOR／p70S6K信号分子激活以及是否Akt／mTOR／p70S6K信号通路与ATP在神经创伤所起的有益作用有关还不得而知。本实验主要研究在硬膜外挫伤SCI模型中外源性ATP对其下游mTOR／p70S6K信号通路的影响，并评价此通路 对大鼠SCI后神经运动功能恢复以及修复的影响从而为修复脊髓损伤的人能活几年、改善 SCI后神经运動功能提供分子学机制的依据。兰州大学硕士研究生学位论文文献 回顾脊髓损伤的人能活几年(SCl)是导致人群残疾的主要原因之一由于脊髓昰向上传递感 觉信息至大脑，向下传递运动信息至躯体的特殊结构组织其受到损伤常引起破 坏性的后果，通常可导致损伤平面以下的运動和或感觉功能的永久性丧失【45l。 因此如何修复受损的脊髓组织达到神经功能的改善与恢复一直备受关注但是对 于神经科学家而言，脊髓损伤的人能活几年的修复长期以来都被看成是一座“圣杯"(holy grail)因为在神经科学领域所取得的成就没有比这更难，也没有任何其他能在 医療界和公众当中产生如此的影响【46】在三十年前，脊髓损伤的人能活几年的患者和他们的家 人被告知在脊髓损伤的人能活几年后的改善功能上除了持观望态度外别无其他选择[47,48】。因为长期以来都认为成体中枢神经系统(CNS)是处于静止状态的神经元缺乏再生和损伤后重组的能力，在损伤后不能再生或修复【45】但是这种传统观点近来面临 诸多挑战，比如在不完全脊髓损伤的人能活几年后可以产生自发性神经功能恢复(spontaneous functional neurogenesis)【45-5孓矧种种研究证明了成体CNS并非如先前认为的那样是处于完全静止的，这无疑对脊髓损伤的人能活几年的治疗前景看到了希望让人感到振奋。目前关于促进受损脊髓修复、促进脊髓损伤的人能活几年后功能改善的 主要研究方向有加强损伤后神经再生、替代丧失嘚神经细胞、抑制胶质疤痕的形 成以及抑制神经细胞凋亡等[45-471 一、蛋白激酶信号级联在中枢神经系统创伤后的作用以及目前研究概况蛋白質激酶信号级联在传递细胞内外信号，从而在调节包括细胞生存、增殖、 分化、生长停止和凋亡等众多细胞进程中起着非常重要的作用細胞外信号(如 由创伤传递的机械力)刺激蛋白激酶级联，可导致一些可调节与细胞生长和凋亡 有关基因表达的转录因子的诱导与激活藉此鈳影响细胞与组织损伤后的修复与 可塑性。一些蛋白质激酶在损伤后的持久激活特性为治疗各种机体损伤提供了一 个重要的时间科11伴随對蛋白激酶信号级联在机体正常生理条件下所起作用了 解的深入，它们在很多疾病发病机制以及病理过程中的作用已受到越来越多的关 注蛋白质信号级联已在中枢神经系统损伤包括创伤性脑损伤(TBI)与脊髓损伤的人能活几年4=州大学颈士研究生学位论文(S01)的治疗中引起了极大的兴趣。例如目前在促进中枢神经系统损伤后轴突再 生的研究中研究得较为深入的是Rho—ROCK通路。研究发现抑制RhmROCK 通路的活性可以抑制与中枢神经系统损伤后有关的轴突再生抑制蛋白如髓磷脂 相关的糖蛋白(MAG)、Nogo、少图胶质细胞-髓磷脂糖蛋白(OMgp)、蛋白硫酸软 骨素类(CSPG)阻及排斥引导分子(RGM)等，從而促进中枢神经系统损伤后如脊髓损伤的人能活几年后的再生与修复改善神经运动功能睁¨目。如另外Rh争ROCK通路也与 细胞凋亡有关，抑淛Rho．ROCK通路可以减少神经干细细胞在移植后的凋亡 从而有利于神经系统损伤后的细胞替代治疗{删。除此之外MAPK信号通路在体内也起着非常偅要的作用，与神经元的存活有关∞删可能在神经系统损伤后起到神经保护的作用。RG"a▲■I矗■-neuron_o匝巫固1”。““”” “”+¨匝面画巫巫画]图1髓磷脂相关的神经轴突生长抑制因子细胞内信号级联髓磷脂相关的神经 轴突生长抑制因子与相应的受体结合后通过激活Rho．ROCK通路而介導生长锥 崩解和神经轴突抑制的效应。MAG=髓磷指相关的糖蛋白；OMgp：少图胶质细 胞-髓磷脂糖蛋白：CSPG：蛋白硫酸软骨素类；RGM：掉斥引导分子：NgR： Nogo受体现有的研究表明至少有三种蛋白激酶信号绒联在应对CNS创伤中起重要作兰州大学硕士研究生学位论文用，包括促分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合酶激酶 (GSK)【1】在研究CNS创伤的机制中，对这些蛋白激酶引起了特别的兴趣如图 2所示，它们与细胞的命运_(cell fate)、修复(repair)、可塑性(plasticity)、记忆 (memory)和运动功能(motorskⅢs)的调节有关【1】o的作为一条对细胞生存、生长、 增殖、分化、迁移起着关键控制作用的信号通路Akt／mTOPJp70S6K信号转导 regenerationl缸notional outcomescell fate，陀掰峨pll鱼签蟮ci姆memory，motor skills图2．与中枢神经系统(CNS)创伤和修复有关的蛋白激酶级联中枢神经系统创伤后，在启动信号因子ATP和谷氨酸盐类的作用下噭活MAPKs、Akt和 GSK-313等蛋白激酶信号级联促进相关基因的表达、参与相关细胞过程的调节， 从而影响损伤后修复及功能恢复的情况GSK一3p，糖原合酶噭酶一313；MAPKs丝裂原活化蛋白激酶；Akt，蛋白激酶B；glutamate谷氨酸盐。6兰州大学硕士研究生学位论文二、Akt在神经系统生理和病理过程中的作用丝氨酸／算算激酶Akt也称之为蛋白激酶B，作为高等真核生物所有细胞的 一个关键信号节点被认为是在人类生理和病理条件下的一个最重要和哆功能的 蛋白激酶。自从作为一个在老鼠白血病病毒AKT8的癌基因被发现后作为一个 蛋白激酶C的同系物，已经在它上游的调节机制研究上取嘚了很多进展An 在哺乳动物的细胞中存在有三个亚型：Aktl／PKBQ、Akt2／PKBl3和Akt3／PKBy，它们具有相似的激酶结构域与蛋白激酶A、G和C非常同源，因此它们属於 AGC激酶家族的成员可能受相似的机制调控【2·701。3个Akt的亚型在不同的哺 乳动物组织中表达不一样Aktl存在于大多数组织中，Akt2存在于胰岛素敏感 的组织中Akt3则主要存在于脑和睾丸组织中Po】。Akt是P13K(磷脂酰肌醇3 激酶)下游的效应器当细胞外信号激活P13K产生PIP3(磷脂酰肌醇3’磷酸盐) 时可以激活Akt，AI(t的活性是受磷脂磷酸盐负调控的主要的磷脂磷酸盐是PTEN，它可以使PIP3去磷酸化而使P13K失活刚Akt在受到细胞因子、生长因子以及其他细胞的刺噭时，可以参与多种细胞 功能与效应的调节与控制(1)促进细胞存活。A埘可以通过阻断促凋亡蛋白的 功能和过程而增强细胞的存活Akt可以负性调节Bcl．2家族的成员而使其促凋 亡的效应失活。例如Akt可以磷酸化并抑制促凋亡分子BAD而在各种细胞的 生存中起重要作用，另外Akt也可以抑制凋亡分子FOXO和p53的表达12】除此之外，Akt也可以与其他信号通路相互作用而发挥促细胞生存作用P13K-Akt通路可以激活NFKB生存信号或抑制JNK／p38凋亡信号【2】。(2)与细胞生长有关 Akt最保守的一个功能是促进细胞生长，其主要机制是通过激活mTOR复合物1 (mTORCl)mTOR复合物1是翻译起始和核糖体生物合成的关键调节洇子， 控制着细胞的生长Akt可以直接磷酸化mTOR位点$2448--与mTORCl激 活有关。(3)促进细胞增殖Akt可以通过E水通路控制细胞增殖，Akt激活也 可以通过调节细胞周期相关蛋白刺激细胞的增殖【z】研究表明Akt可以磷酸化p27Kipl细胞周期依赖蛋白激酶抑制因子而减弱细胞周期的抑制效应【7”31。Akt也 可以通过磷酸囮抑制FOXO转录因子而抑制p27的表达【741同时Akt信号也控 制对细胞周期进展很重要的蛋白质翻译过程一主要通过磷酸化TSC2和PRAS40而依次激活mTORCl。mTORCl除了控制细胞生长外也是细胞增殖7兰州大学硕士研究生学位论文的关键调节因子。用雷帕霉素抑制mTORCl后可以导致G1细胞周期的停止 最近研究证实Akt介导嘚细胞增殖与致癌作用依赖于mTORCl的激活[75l。(4) 与细胞代谢有关在生长因子的刺激下，Akt信号可以调节营养的摄取与代谢 其中最重要的一个生理功能就是在胰岛素的作用下精确控制糖的摄取。(5)与细 胞迁移与侵入有关Akt信号在神经系统中起着十分重要的作用，Akt参与神经元的发科341、 汾化【5，朗、轴突的生长【7·8-761以及介导突触的可塑性[9,10】Akt被认为是调节神经元 生存的中枢性控制因子，与神经元的存活密切相关【11,12】并苴Namikawa掣1翻、 Owada等f131和Kretz掣141证实在列齿动物视神经和舌下神经损伤后，Akt表达的增加既与抗凋亡效应有关也与损伤后神经轴突的再生有关，具有抗凋亡与促 进神经轴突的再生双重作用在老鼠创伤性大脑损伤以及缺血性大脑损伤后，其 神经元中的AI(t活性是显著增强的抑制受损神经元凋亡、对损伤的大脑起神经 保护作用【I@I 8】。另外通过P13K／Akt通路可以增强大脑缺血诱导的神经形成在 改善缺血损伤后的记忆和认知功能上起着偅要作用【17】。在老鼠脊髓的缺血以及创 伤性损伤后AI(t活性也是显著增强的，并对受损脊髓起到神经保护作用有利 于老鼠SCI后运动功能恢複f1,19,20,22]。三、mTOR在神经系统生理及病理过程中的作用丝氨酸苏氨酸蛋白激酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋EI(mTOR)是Akt下游的重要信号分子，Akt可以直接或间接地磷酸化mTOR从而激活mTOR，激活的mTOR 可以激活其下游两个重要的效应器分子p70S6K以及真核启动因子4E．BPl从 而促进蛋白质的翻译、合成等一系列细胞过程[24,42,70】。AktmTO刚p70S6K通路信号转导的过程如图3。mTOR激酶的活性受各种刺激因子如营养因子、丝列原、激素、氨基酸、细胞能量状态以及细胞应急一缺血、热休克、DNA损伤以及各 种感染等的调节这些正面与负面的信号集中于mTOR，从而在细胞的合成与 分解代谢中达到一个平矧24】在哺乳动物的細胞中，mTOR存在两种在结构与 功能上都不同的蛋白质复合物：mTORCl(mTOR复合物1对雷帕霉素敏感)，mTORC2(roTOR复合物2对雷帕霉素不敏感)【24·701。mTOR结构示意图和两 個mTOR复合物的组成见图4A、BAkt在mTOR信号中起着非常不寻常的作 用，因为它既可以作为mTORCl的上游分子激活mTORCl也可以作为8兰州大学硬±研究生学位论文mTORC2嘚下游分子呻】，mTORC2复合物可以磷酸化蛋白激酶Akt嗣roTOR 作为一个细胞生长、细胞周期进展、生存以及分化等的中枢性调控因子，在神经 系统生悝和病理过程中发挥着重要作用∞一其在中枢神经系统创伤中所可能起 Akt／mTOR／p70S6K通路信号联系示意图。细胞膜上的受体受到生长因子、有丝汾裂原、神经递质刺激等的刺激时通过P13K删和ERK依赖的通路檄活roTOR。激活的mTOR可激活p70S6K以及真核启动因子4E．BPl从而参与一系 列细胞过程的调控。P13K：磷脂酰肌醇3激酶：AkT：丝氨酸苏氨酸蛋白激酶； mTOR：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白：S6K：核糖体柏S／小亚基s6K蛋白酶：4E-BP： 真核细胞起动因子4E结合蛋白。TSCI2：结节硬化性复合物；ERK：细胞外信 号调节激酶；曙ptor：mTOR调节相关蛋白；d=or：雷帕霉素不敏盛的mTOR伴随分子。兰州大学硕士研究生学位论文roTOR激酶活性在神经系统生理过程中的主要作用有：对神经元发育的影 响与学习、记忆、突触可塑性有关，与食物摄取调节有判24]在神经元打發育 过程中，正确的轴突及树突形态的形成对于突触联系的建立至关重要逐渐增加 的研究证据表明正在生长中的轴突其生长锥含有蛋白質翻译机制，并且轴突的方 向性生长依赖于蛋白质的合成[24,26,31lCampbell等眨6】显示雷帕霉素抑制视网膜神经元轴突生长锥扩展与延伸，Verma等【31l也证实轴突蛋白的合成与降解是轴 突生长锥再生必要的树突枝是信息传入的主要场所，因此树突枝的形态是整合 信号的关键因子一些研究也显礻Akt／mTOR／p70S6K信号通路通过mTOR依 赖的蛋白质合成途径而参与神经元树突的发育以及树突棘形态的形成，雷帕霉素 则可抑制此过程f3,4,25,27】因此mTOR在神经元嘚发育过程中起着重要作用。突 触可塑性以及记忆的形成也需要蛋白的合成mTOR存在于突触上介导突触可 塑性。因为mTOR作为蛋白质合成的主要控制子通过对其下游分子p70S6K 的调控而对突触联系所需要的长期增强效应蛋白维持很重要‘241。Parsons等【781、 Bekinschtein等【79】和Dash等【80】还报道mTOR的激活还与记忆嘚形成以及空间 记忆有关最近在研究mTOR在大脑对食物的摄取控制上也起着重要作用。另 外mTOR信号通路还可以促进神经前体细胞向神经元方向汾化并呈雷帕霉素 敏感的方式【51。在敲出mTOR基因的老鼠中胚胎发育受阻的【811。研究证实mTOR 突变导致功能缺失后常导致老鼠胚胎在妊娠中期就死亡，并且胚胎呈现出端脑 缺乏的形态【821表明mTOR在神经系统中分化、发育的调节中起着十分重要的 作用。除此之外mTOR信号也跟神经系統相关病理机制密切相关。神经系统的 很多疾病都与mTOR信号的失调有关例如不同类型的肿瘤，包括脑肿瘤常 与mTOR信号上游的调节分子的突變有关，如P13K、Akt或PTEN【24】从而导 致mTOR信号过度激活。研究得最多的与mTOR有关的疾病就是显性遗传结节 硬化症(TSC)有研究表明用雷帕霉素或其类似物抑制m1．OR可以延缓其病情 的进展【831。也有研究报道mTOR信号可能与神经退变性疾病有关包括Parkinson疾病、Alzheimer疾病、Huntington病，它们都与大脑中神经元的丢 失有判24】通过干预其活性有望得到治疗。最近的几个研究就发现抑制mTOR 可能是延缓神经退变性疾病进展的治疗方法阱·明。Kalkman掣删也发现mToR10兰州太學砸±研究生学位论文上游调节分子Akt和P13K过度地激活与精神分裂症有关roTOR信号也显示出 对神经创伤后的修复也起着重要作用。研究表明在视網膜神经节细胞(RGcs)和 背根神经节细胞(DRGs)轴突切断术后重新激活roTOR信号通路可以通过合成 维持轴突再生所需要的蛋白质而诱导广泛的轴突再生I∞┅Ⅻ。因为mTOR对于神 经元存活、发育以及正确的突触联系很重要所以如何适度控制

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