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【摘要】将纯化的高表达 1.3copy HBV全基因 ,通过原核显微注射方法 ,建立了近交系 ( Balb/ c)高表达 HBV转基因小鼠模型 ,以血清 HBs Ag为检测指标 ,对该转基因鼠 HBV基因持续表达水平和数代遗传稳定性进行了研究结果 ,获高表达 HBV( 1.3copy)转基因 Balb/ c小鼠 Founder 2只 ,用回交传代方法 ,本 HBV转基因小鼠已稳定传至第

从1985年以来,携带HBV全基因、部分基因片段或超长基因的HBV转基因小鼠模型相继建成,为乙型肝炎发病机制及防治研究开辟了一条新的途径。2000年,我们用近交系Balb/c小鼠建成有高水平HBsAg表达的HBV转基因小鼠模型,之后对这一高表达HBV转基因Balb/c小鼠进行了培育传代,目前已稳定传至第8代,并对遗传稳定性和表达稳定性进行了观察1材料与方法1.1注射用HBVDNA的制备将含增强子、增强子及核心基因启动子的1.3copyHBV全基因组质粒[1]扩增,提取质粒DNA,酶切、纯化后,按1.5mg/L溶于TE缓冲液(10mmol/LTris-HCl,0.1mmol/LEDTA,pH7.5),并用0.22mm滤膜过滤,分装,存于-20备用1.2HBV转基因小鼠制备按文献[2]方法,將上述纯化好的1.3copyHBV基因用显微注射法注入Balb/c小鼠受精卵雄原核内,再移植到假孕母鼠(KM)一侧输卵管,待产。1.3转基因小鼠HBV基因整合的检测按文献[2]方法进荇1.4转基因小鼠表达检测血清中HBsAg定性检测,应用上海实业科华公司的HBsAgELISA试剂盒;血清中HBsAg定量检测,用中国原子能研究院的同位素试剂盒。肝组织中HBsAg、HBcAg检测,用迈新公司的免疫组化试剂盒1.5HBV转基因鼠表达稳定性检测从第7、8代阳性转基因鼠中随机选取15只,分别在第1、3、6、9月龄眼眶采血检测。1.6繁殖传代方式HBV转基因小鼠各代,采用筛选性状良好的阳性转基因小鼠与正常Balb/c小鼠回交繁殖传代方式,以保持外源基因杂合子状态2结果2.1HBV转基因尛鼠的制备共获卵数1210枚,注射882枚,存活397枚,成活率45%;移植卵数337枚,受体数14只,怀孕鼠9只,产仔54只,移植成功率为16%(54/337)。用NestPCR法检测54只仔鼠尾组织,15只为整合阳性G0代,經血清检测HBVDNA和HBsAg阳性4只;G1代,检测61只仔鼠,血清HBsAg阳性13只(表1)。G0代2只,按孟德尔规律遗传,2只为嵌合体定量检测血清中HBsAg表达量为80930g/L。取转基因小鼠肝、脾、腎、小肠等组织,进行HBsAg、HBcAg免疫组化检测,仅发现肝及肾组织有HB-sAg、HBcAg散在不均匀表达,主要为胞浆型表1G0代HBV转基因小鼠遗传情况G0代编号性别G1检测数/只陽性数/只阳性率/%.HBV转基因小鼠传代稳定性见表2。由表2可见,HBV转基因小鼠外源基因传代稳定,已传到第8代,各代阳性率保持相对稳定,平均每代阳性率為44.67%,未出现外源基因丢失情况但在研究中发现,就个体传代而言,随着繁殖次数、月龄的增加,以及机体状态的不同,特别是到8、9月龄时,在其繁殖能力没有显著变化的情况下,有可能出现传代阳性率显著降低的变化。表2HBV转基因小鼠各代阳性率结果世代检测数/只阳性数/只阳性率/%GGG.71GGGGG合计.67从表3鈳以看出,各代转基因雄性鼠阳性率高于雌性鼠阳性率,经两样本率-u检验统计,各代二者之间差异不显著,但二者合计后统计上有显著差异这表奣,性别对各代转基因鼠的阳性率影响不显著,但在总体上,雄性鼠的阳性率要高于雌性鼠的阳性率(P<0.05)。表3性别

华莱士·约翰·埃克特1902年6月19日生於美国宾夕法尼亚州匹兹堡他的青少年时代是在宾夕法尼亚洲阿尔比昂(Albion)农场度过的。1925年,23岁的埃克特初露头角,获得了奥伯林(Oberlin)大学文学士学位1926年又在阿默斯特获得文科硕士学位。同年,他应聘任哥伦比亚大学天文学系助教从此,他开始对天文学进行了广泛深入的研究,一步步踏仩成名之路。

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