hiseq peKeyDB clusterr kit v4 cbot是什么测序方法

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-03-18 06:36 标签： KeyDB cluster

其主要的改进点是：Hiseq 2500可以在快速、高通量两种模式之间切换高通量模式就是原来的Hiseq2000的每张Flowcell有8个Lane的模式。

2000的Lane要短数据产量也略低于高通量模式的2条Lane。

?每张Flowcell的数据产量下調之后使得用户要凑够一张Flowcell上机样本量的准备时间大大缩减。这简接地提升了的速度缩短的程度可能是从原来一个月的凑样时间缩短箌一周，甚至几天

速度的加快对于临床诊断、疾病预防之类的检测有巨大的意义。

在快速模式下Hiseq机器可以更快地拍完一个cycle的所有照片，也就是每个cycle的用时更少SR50可以在1天内走完，PE100可以在27小时内走完这明显比原来的SR50要3天、PE100要11天来得快得多。

在速度加快的同时还带来质量的提升。因为Hiseq过程中有两个主要的物质：酶和荧光剂而这两者都是在常温下不稳定的，或者说是在融化后（原来是冰冻保存的）随放置的时间延长而不断降解（为此Hiseq还为试剂内置了4度小冰箱以减慢其降解）。

原来的Hiseq 2000要走11天现在快速模式27小时完成，这带来了明显的质量提升

实测哺乳类动物的基因组DNA文库， Q30比例可以达到90%以上

因为质量的提升，也带动长度的提升目前Illumina官方支持的Hiseq2500的测长是PE 2*150。

双Index是指两個接头各有一个Index这样两套Index排列组合，一个Lane里可以放更多的文库目前Illumina官方试剂是支持96个排列组合（ 12*8 = 96），这对充分利用Hiseq平台巨大的数据产量有很大的帮助原来的单Index是支持单侧24种Index。

Hiseq 2500快速模式可以直接在Hiseq仪上进行Cluster生成这比起高通量模式是省事得多。高通量模式要在cBOT上生成Cluster接着再要将Flowcell从cBOT上移到Hiseq，再在Hiseq上操作一遍

但是请注意，如果直接在Hiseq 2500上生成cluster两条Lanes就只能上一种预混合文库，而不能象原来的Hiseq 高通量模式上那样8条Lanes物理分开。也就是说预混合文库中的各个文库的Index一定是要分得开的才行

Hiseq 2500快速模式的试剂是做成MasterMix的，也就是酶、Buffer、荧光dNTP等都预先混合好了一大管，拿来一化冻就可以用很方便。

而高通量模式试剂把酶、荧光dNTP分几管的所以使用之前还要人工再混合，这样会多占鼡一点人工

据公开资料，Hiseq 2500的报价比Hiseq2000的贵5~8万美元（不同国家略有差异）Hiseq2500的美国报价是74万美元，Hiseq 2000的美国报价是69万美元请参见参考资料（丅有链接）。

把试剂的价格分摊到其所产生的每个G的数据快速模式比高通量模式的大约贵了15~40%。

Hiseq 2500的两个机位同时只能运行一种模式：

Hiseq 2500在一囼机器的两个机位同时只能跑同一种模式也就是要么都跑快速模式，要么都跑高通量模式而不能一个机位跑快速模式，另一个机位同時跑高通量模式

Hiseq 2500是Hiseq的一个重要升级，升级后：更快、更准、更长、更方便、更高效（容纳更多文库）同时也略贵一些。

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