求助，帮我看看嘛如何配将

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-02-23 04:03 标签： 帮我看看嘛

我怀疑其中没有蛋白酶抑制剂,但別人告诉我PMSF本身就是抑制剂,是这样的吗? 另外,我看到论坛上有些RIPA配方的成分比我这个多好几项,所以我不敢保证我这个没有问题!

我就是按照这個配方配的,而且PMSF也没有用前现加,请高手帮忙分析我的问题!

PMSF一定要现用现配因为30min就失效了

我用的裂解液也不是这个配方，但是根据个人组織及待测目的蛋白的不同裂解液会有所不同能做出来的就是最适合你的了

在蛋白提取过程中，由于需要将组织或细胞通过机械力破碎會导致蛋白酶的释放及活化。蛋白酶活化后可能会导致待测的目的蛋白降解。

因此蛋白酶抑制的作用是抑制组织中存在的多种蛋白酶其本质是各个蛋白酶对应降解的底物短肽。

组织中一般存在金属蛋白酶（metallo）、丝氨酸蛋白酶（serine）、半光氨酸蛋白酶（cysteine）和天冬氨酸蛋白酶（aspartic）等几大类蛋白酶抑制剂并不是加的种类越多越好，只要能有效保护你的蛋白不被降解就够了

如果你对自己要检测的蛋白足够了解，如蛋白序列中仅含有Serine酶解位点那么单加PMSF就足够了。但大多数情况下我们并不知道待测蛋白中含有哪些酶解位点，因此就尽可能的加叺各个种类的protease inhibitor此外，正如二楼所说要临用现加。

至于Na3VO4一般用于检测磷酸化的蛋白。其作用是保护磷酸化的蛋白不会被磷酸酶还原洇此在做磷酸化的signal transduction时需添加。但有时不加Na3VO4也不会影响磷酸化蛋白的检测

希望对你有帮助。祝实验顺利

谢谢DIGE的解答,非常详细!
不好意思,还想问一下,这些蛋白酶抑制剂都是临用现加呢?还是仅仅PMSF临用现加?

除EDTA外，一般都是临用现加

第一台是台式主机价格1499元。第②台是笔记本价格2400元。帮忙看看这两台电脑是否配配置属实（是不是虚假配置信息）价格是否合理，谢谢了！... 第一台是台式主机价格1499元。
第二台是笔记本价格2400元。
帮忙看看这两台电脑是否配配置属实（是不是虚假配置信息）价格是否合理，谢谢了！

    笔记本还要2400㈣代I5，多老的配置了 不超2000至于那个台式机，洋垃圾罢了固态硬盘都不知道是什么牌子的山寨配件 

    谢谢，差点被无良商家坑了

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