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高质量DNA获取方法之月桂酸钠法
高质量DNA获取方法之月桂酸钠法
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从组织中获取DNA难吗？不难，真不难。高一就有开设的从鸡血中获取DNA的生物实验课，很简单的几步就可以得到DNA。但要想获取高质量的DNA，尤其是从一些富含多糖、多酚、淀粉、纤维和蛋白的组织，后面用于酶切、高通量测序大片段文库的构建,还是有一定的难度的。
最近协助北京农业生物技术研究中心一个老师提取桃叶片DNA还是遇到了一些困难，因为老师要做桃的个体重测序，因此对DNA的要求还是非常高的。之前跟其他很多老师交流植物DNA的提取，大多数目前仍然使用CTAB法，有些老师购买试剂盒进行提取，其实很多植物DNA提取试剂盒成分也是CTAB。CTAB法是提取植物DNA非常经典方法，但在提取的过程中由于要在65℃水浴中放置1个小时，因此耗时较长。我们在使用该法提取桃DNA时，获得DNA中含有大量的蛋白和多糖，虽然通过多次的苯酚氯仿抽提可以大部分去除，但DNA得率较低。在这里给大家分享一种快速获取植物高质量DNA的方法，供大家在提取植物DNA时作为参考，用该法提取的植物DNA完全满足后续酶切、BAC文库构建、高通量测序大片段文库构建，将该法称之为月桂酸钠法。
月桂酸钠抽提缓冲液： Tris-Hcl（pH8.0）100mmol/L；NaCl 100mmol/L；EDTA（pH8.0）20mmol/L；月桂酸钠 1%；
配法：准确称取NaCl 5.844g，月桂酸钠 10g置于1000mL烧杯中，加入100ml Tris-Hcl（1M）以及40mLEDTA（0.5M）、800mlddH2O，用盐酸调节pH至8.0，定容至1000 mL，灭菌后室温保存。
月桂酸钠英文名称：sodium lauroyl sarcosine
分子式：C15H28NaO3N，分子量：293.39。
以该法大量获取玉米叶片DNA为例的实验流程： （1）选取适量的玉米幼苗新鲜叶片，以纱布捆扎，做好标记，置于液氮中保存； （2）研钵以液氮预冷，将玉米叶片置于研钵中，倒入液氮，迅速研磨至粉末级，期间时时加入液氮，防止研磨过程中DNA被降解； （3）将研磨好的粉末移入灭菌后的50mL抽提试管中，用移液管加入10mL月桂酸钠抽提缓冲液，反复缓慢的摇匀； （4）用移液管向50mL抽提试管中加入等体积（10mL）酚：氯仿：异戊醇（25:24:1），反复缓慢的摇匀； （5）12000 rpm，4°C离心20min后取出，小心吸取上清液16mL于新灭菌的50ml抽提试管中； （6）向上述抽提试管中加入12mL异丙醇，上下缓慢颠倒数次，有白色絮状沉淀析出，颠倒时注意往一个方向，防止沉淀散开，不利于后续实验； （7）将白色絮状沉淀用枪头从抽提试管中轻轻挑出，至于2mL EP管中； （8）向上述2mL EP管中加入1.8mL70%乙醇，反复轻轻震荡洗涤，4°C，12000 rpm，高速离心15min，弃上清，重复此步骤两次； （9）将得到的白色沉淀再次4°C，12000 rpm短暂离心数秒，以移液器吸干残留乙醇； （10）白色沉淀置于37°C干燥箱中，使残存的70%乙醇全部挥发干净，这个过程中要经常拿出观察，防止过度烘干，不利于后面溶解； （11）待白色沉淀变透明后，向2mLEP管中加入0.9mLTE缓冲液（pH8.0），放置于65℃恒温箱中，期间轻微弹匀，使DNA充分溶解； （12）DNA完全溶解后，加入5μL RNase(0.1mg/mL)，置于37°C干燥箱中30min，消化RNA，取出3μL，以1%琼脂糖胶检测是否有RNA残留； （13）待RNA消化完成后，向EP管中加入等体积（0.9mL）氯仿，轻轻摇匀； （14）4°C，12000 rpm高速离心15min； （15）吸取0.7mL上清置于1.5ml新EP管中，加入1/10体积(约0.07mL)NaAc(3M/L)溶液，轻轻摇匀； （16）向上述EP管中加入等体积（0.7mL）异丙醇，轻轻摇匀后，于-20°C静置20min； （17）4°C，12000 rpm高速离心15min，弃上清； （18）将得到的白色沉淀以70%乙醇洗涤两次，去除残留的乙醇； （19）白色沉淀置于37°C干燥箱中，使残存的70%乙醇全部挥发干净，该过程中要经常拿出观察，防止烘干过度，不利于后面溶解； （20）待白色沉淀变透明，管中无残留的乙醇味后，加入200μL TE（pH8.0），于37°C干燥箱中溶解； （21）待DNA完全溶解后，取出1μL，以分光光度计测定OD值，分装后于保存（-20°C）。 以该法获取的玉米叶片DNA电泳图如下：
DNA提取过程中常见问题及建议解决方案：
相关实验方法
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DXY All Rights Reserved.我的月桂一个月前叶子开始变干了，怎么回事啊？
还有牡丹花一个礼拜之内，叶子也干枯，是不是得了什么病？
感谢能够帮我解答问题的朋友！！
用大生600倍液或敌力脱2500倍液或其他杀菌剂喷雾防治就可以了
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月桂女神的故事
月桂女神的故事　　传说一：　　　　当年与宙斯的大儿子阿波罗互相爱慕。终于，有一天阿波罗终于按捺不住自己对月桂女神的爱恋，对她展开的追求。　　　　可是因为阿波罗自己是太阳神，身体聚集了大量的热能，使得月桂难以忍受。所以每次阿波罗追月桂，她就会躲。就这样，一追一躲，终于月桂无法忍受了，她大喊救命。　　　　她的父亲河神林恩因不忍女儿遭受如此痛苦，就将大地劈裂了一条大缝。月桂纵身一跳，化成了一棵大树从裂缝中长出。　　　　自此，这棵树就叫做月桂树。　　　　而阿波罗并不知道缘由，认为月桂宁可变成大树也不愿和他在一起。直到有一天，他突然意识到原来是因为自己太热了才使得月桂化作一棵大树。阿波罗发誓要永远为月桂留下一片遮蔽。那就是我们现在知道的太阳黑子，在太阳神心中留下的永远的遮蔽，他为月桂留下的遮蔽。　　　　传说故事二：　　　　有一次，阿波罗看到小爱神丘比特正拿着弓箭玩。他毫不客气地警告丘比特说：“喂！弓箭是很危险的东西，小孩子不要随便拿来玩。”原来小爱神丘比特有两支十分特别的箭：凡是被他用那支黄金制成的利箭射到的人，心中会立刻燃起恋爱的热情；要是被另外一支铅做的钝箭射到的人，就会十分厌恶爱情。　　　　丘比特被阿波罗这么一说，心里很不服气。他趁着阿波罗不注意的时候，“嗖”的一声把爱情之箭射向阿波罗，阿波罗心中立刻燃起了爱情的火焰。正巧这时，来了一名叫达夫妮的美丽少女。调皮的丘比特把那支铅制的钝箭射向达夫妮，被射中的达夫妮，立刻就变得十分厌恶爱情。　　　　这时候被爱情之箭射中的阿波罗已经深深地爱上了达夫妮，于是他立刻对达夫妮表达自己的爱慕之情。　　　　可是达夫妮却很不高兴的说：“走开！我讨厌爱情！离我远一点！”说着就像羚羊似的往山谷里飞奔而去。可是阿波罗对于追求达夫妮并不灰心，他拿着竖琴，弹奏出优美的曲子。不论谁听到阿波罗的琴声，都会情不自禁的走到他面前聆听他的演奏。躲在深山里的达夫妮也听到了这优美的琴声，也不知不觉地陶醉了。“哪儿来的这么动人的琴声？我要看看是谁在弹奏。”说着，达夫妮早已经被琴声迷住了，走向了阿波罗。躲在一块大石头后面弹着竖琴的阿波罗立刻跳了出来，走上前要拥抱达夫妮。达夫妮看到阿波罗，拔腿就跑。阿波罗在后面苦苦追赶，并且大声叫喊：“我又不是你的仇人，也不是凶猛的野兽，更不是无理取闹的莽汉，你为什么要躲着我呢？”尽管阿波罗在后面不停的对达夫妮呼喊，达夫妮仍然当作没听到，继续向前飞奔。不过达夫妮跑的再快，也跑不过阿波罗。跑了好一阵子，达夫妮已经跑的筋疲力尽，上气不接下气。　　　　最后，她倒在地上，眼看着阿波罗就要追上了，达夫妮急得大叫：“救命啊！救命啊！”这时候，河神听见了达夫妮的求救声，立刻用神力把她变成了一颗月桂树。只见达夫妮的秀发变成了树叶，手腕变成了树枝，两条腿变成了树干，两只脚和脚趾变成了树根，深深地扎入了泥土中。阿波罗看到了懊悔万分，他很伤心的抱着月桂树哭泣，可是月桂树却不停的摇动。虽然达夫妮已经变成了月桂树，但是阿波罗依然爱着她。　　　　阿波罗凝视着月桂树，痴情的说：“你虽然没能成为我的妻子，但是我会永远的爱着你。我要用你的枝叶做我的桂冠，用你的木材做我的竖琴，并用你的花装饰我的弓。同时我要赐你永远的年轻，不会衰老。”变成月桂树的达夫妮听了，深深地受到了感动，连连点头，表示谢意。　　　　也许是受到了阿波罗的祝福，月桂树终年常绿，是一种深受人们喜爱的植物。
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