月桂酸怎么收集

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2011-09-08 14:46 标签：
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高质量DNA获取方法之月桂酸钠法
高质量DNA获取方法之月桂酸钠法
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从组织中获取DNA难吗？不难，真不难。高一就有开设的从鸡血中获取DNA的生物实验课，很简单的几步就可以得到DNA。但要想获取高质量的DNA，尤其是从一些富含多糖、多酚、淀粉、纤维和蛋白的组织，后面用于酶切、高通量测序大片段文库的构建,还是有一定的难度的。
最近协助北京农业生物技术研究中心一个老师提取桃叶片DNA还是遇到了一些困难，因为老师要做桃的个体重测序，因此对DNA的要求还是非常高的。之前跟其他很多老师交流植物DNA的提取，大多数目前仍然使用CTAB法，有些老师购买试剂盒进行提取，其实很多植物DNA提取试剂盒成分也是CTAB。CTAB法是提取植物DNA非常经典方法，但在提取的过程中由于要在65℃水浴中放置1个小时，因此耗时较长。我们在使用该法提取桃DNA时，获得DNA中含有大量的蛋白和多糖，虽然通过多次的苯酚氯仿抽提可以大部分去除，但DNA得率较低。在这里给大家分享一种快速获取植物高质量DNA的方法，供大家在提取植物DNA时作为参考，用该法提取的植物DNA完全满足后续酶切、BAC文库构建、高通量测序大片段文库构建，将该法称之为月桂酸钠法。
月桂酸钠抽提缓冲液： Tris-Hcl（pH8.0）100mmol/L；NaCl 100mmol/L；EDTA（pH8.0）20mmol/L；月桂酸钠 1%；
配法：准确称取NaCl 5.844g，月桂酸钠 10g置于1000mL烧杯中，加入100ml Tris-Hcl（1M）以及40mLEDTA（0.5M）、800mlddH2O，用盐酸调节pH至8.0，定容至1000 mL，灭菌后室温保存。
月桂酸钠英文名称：sodium lauroyl sarcosine
分子式：C15H28NaO3N，分子量：293.39。
以该法大量获取玉米叶片DNA为例的实验流程： （1）选取适量的玉米幼苗新鲜叶片，以纱布捆扎，做好标记，置于液氮中保存； （2）研钵以液氮预冷，将玉米叶片置于研钵中，倒入液氮，迅速研磨至粉末级，期间时时加入液氮，防止研磨过程中DNA被降解； （3）将研磨好的粉末移入灭菌后的50mL抽提试管中，用移液管加入10mL月桂酸钠抽提缓冲液，反复缓慢的摇匀； （4）用移液管向50mL抽提试管中加入等体积（10mL）酚：氯仿：异戊醇（25:24:1），反复缓慢的摇匀； （5）12000 rpm，4°C离心20min后取出，小心吸取上清液16mL于新灭菌的50ml抽提试管中； （6）向上述抽提试管中加入12mL异丙醇，上下缓慢颠倒数次，有白色絮状沉淀析出，颠倒时注意往一个方向，防止沉淀散开，不利于后续实验； （7）将白色絮状沉淀用枪头从抽提试管中轻轻挑出，至于2mL EP管中； （8）向上述2mL EP管中加入1.8mL70%乙醇，反复轻轻震荡洗涤，4°C，12000 rpm，高速离心15min，弃上清，重复此步骤两次； （9）将得到的白色沉淀再次4°C，12000 rpm短暂离心数秒，以移液器吸干残留乙醇； （10）白色沉淀置于37°C干燥箱中，使残存的70%乙醇全部挥发干净，这个过程中要经常拿出观察，防止过度烘干，不利于后面溶解； （11）待白色沉淀变透明后，向2mLEP管中加入0.9mLTE缓冲液（pH8.0），放置于65℃恒温箱中，期间轻微弹匀，使DNA充分溶解； （12）DNA完全溶解后，加入5μL RNase(0.1mg/mL)，置于37°C干燥箱中30min，消化RNA，取出3μL，以1%琼脂糖胶检测是否有RNA残留； （13）待RNA消化完成后，向EP管中加入等体积（0.9mL）氯仿，轻轻摇匀； （14）4°C，12000 rpm高速离心15min； （15）吸取0.7mL上清置于1.5ml新EP管中，加入1/10体积(约0.07mL)NaAc(3M/L)溶液，轻轻摇匀； （16）向上述EP管中加入等体积（0.7mL）异丙醇，轻轻摇匀后，于-20°C静置20min； （17）4°C，12000 rpm高速离心15min，弃上清； （18）将得到的白色沉淀以70%乙醇洗涤两次，去除残留的乙醇； （19）白色沉淀置于37°C干燥箱中，使残存的70%乙醇全部挥发干净，该过程中要经常拿出观察，防止烘干过度，不利于后面溶解； （20）待白色沉淀变透明，管中无残留的乙醇味后，加入200μL TE（pH8.0），于37°C干燥箱中溶解； （21）待DNA完全溶解后，取出1μL，以分光光度计测定OD值，分装后于保存（-20°C）。 以该法获取的玉米叶片DNA电泳图如下：
DNA提取过程中常见问题及建议解决方案：
相关实验方法
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龙之信条黑暗觉者帝月桂叶怎么获得 帝月桂叶获得方法介绍
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龙之信条黑暗觉者游戏中相信很多玩家都不知道帝月桂叶怎么获得吧，今天小编就来给大家讲解一下帝月桂叶的获得方法，相信一定可以帮到不知道帝月桂叶怎么获得的玩家。
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龙之信条黑暗觉者帝月桂叶怎么获得？
帝月桂叶是一种药草，游戏中小女巫最后那个任务的地点可以获得，还可以在自己家拿草药和她换药酒，游戏后期黑咒岛应该也有很多。
以上就是游戏中帝月桂叶的获得方法，相信一定可以帮到不知道帝月桂叶怎么获得的玩家。
关键词： 帝月桂叶
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