求助，甩棍第三节甩到一半出不来了怎么办？【刀吧】_百度贴吧
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求助，甩棍第三节甩到一半出不来了怎么办？收藏
前两天买了根GAS 21寸，今天中午刚接到快递，很兴奋地拆开包装拿出来把玩，发现第三节甩到一小半怎么也出不来了，拆了几遍也没解决问题。因为以前没用过甩棍，所以不知该怎么办好，求用过的大神给看看，在此先谢过了情况如2楼照片所示：
目测洞太小··不好钻··
兄弟忘了抹三哥神油了吧
……兄弟啊………多试试
缺乏润滑嘛，活塞运动多一些就好了。。
是不是第一节不直
难道是假GAS？
应该是出产是钢管的精度就有问题.GAS售后好说话,直接退回吧..
我也想买。多少钱。哪里买的。。。
有点热的还是山无陵的。。我也刚入了一根GAS23寸。。今天刚下单
狐狸的飘过
这是加工精度问题，属于质量问题了退或是换吧
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【求助】怪事！内参western 结果再也出不来了！
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这个帖子发布于10年零353天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
近一段时间正在学习western blot技术，所以先用内参来熟悉整个流程。经过几次操作，已经能够出现内参NADPH的条带，但由于条带颜色较淡，可提高二抗浓度后却怎么也出不了条带，我怀疑的几个原因都被一一排除了，如：1、是否蛋白讲解了，我换用刚提一个月的蛋白还是没有；2、用PCR仪来变性蛋白可能不充分，我就改用沸水煮5分钟可还是出不来；3、我不愿看到的一抗和二抗失效了？ 可我换用其他实验室的actin内参和pierce的二抗可还是出不来。真是很郁闷！ 我想wesern就电泳、转膜、免疫检测和化学发光检测四步，到底哪个环节出问题呢？将实验条件贴出来请大家帮我分析一下，先谢了！1、电泳:样品95℃加热5分钟变性，上样量约100ug左右，设定恒压100V，电泳至一条线时改为150v，观察到溴酚蓝刚出胶底部停止电泳，根据marker指示，切取内参所在的条带。2、转膜:PVDF 膜甲醇中润湿膜15秒后转移缓冲液中平衡，正确的顺序组装“三明治”，350毫安转2小时上述两步由于用立春红染色能出现蛋白条带应该可以排除3、免疫检测用5％牛奶TBS封闭2小时，一抗NADPH（36KD）和actin（47KD）TBS稀释后和膜反应，4℃过夜。第二天，二抗TBS稀释后室温和膜孵育2h4、化学发光检测pierce的ECL试剂A B液1：1混合后与膜室温孵育5分钟，再显影定影，胶片淡蓝色透明未见条带!最有可能的一步我想还是免疫检测这一步，到底什么原因呢
不知道邀请谁？试试他们
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laogulaogu edited on
这样看来，一抗不行了，试试从其他作出来的哪里借一点试试。难道是封闭时间太短了，那么只要抗体没有问题，也应该有条带，如果一点都没有，我认为肯定是抗体的问题了！
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感谢uuboy战友 ！我买的内参是康成公司的NADPH，曾经也怀疑是一抗出问题了，但用其他实验室的β-actin内参和二抗也是出不来！
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那么实在不知道了，真复杂，感觉没有什么不对的地方了！实在找不到原因的话，换个其他指标看看，没有办法了呀！
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TBS的 PH值很重要，曾经我们实验室一段时间内因为这个不对，都没做出来，建议重调一下
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我们实验室的操作是1.封闭 1h2. 一抗 2 h就够了
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我想封闭和免疫反应的时间可能不会导致结果全无。也许是TBS的PH值有问题，我是配好10*的母液，调PH至7.6，使用前再稀释使用，难道母液放置时间过长会引起PH值变化吗，以前出结果时也是用的该母液稀释的，我重配再试试。谢谢luying5204053、超马两位战友！
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果真是TBS的问题，忙了两个星期，竟然是这个原因，不过还是挺高兴的，总算找到原因了，也因此学习很多东西！
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我的实验现在也出现了类似的结果，50KD 的目的蛋白做出来的条带很好，可是内参β-actin却怎麽也做不出来，我用得是***的内参，HRP标记好的，所以跟二抗一起加入，以前做的几个指标都没有问题啊，现在怎么突然做不出来内参了，怎么回事呢？真怕是内参失效了呢！会不会也是这个TBS液PH值的原因呢？可我以前从未调过TBS液的PH值的呀！
还有一点，我的一抗、二抗通常是用TBST液配的5％的脱脂奶粉稀释的，那我现在是该调整TBST液的PH值呢还是改用TBS液配5%的脱脂奶粉呢？这个PH值具体要调到多少呢？请诸位高手赐教！
我的TBST液配方是：Tris-Hcl(PH8.0)10ml,
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问题同楼上。脱脂奶到底用什么配。TBS的pH到底是多少？用试纸调pH值，每次配肯定有一些差别，怎么办？ 洗的时候大家都洗几分钟几次啊？
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hanhandyx 战友： 我觉得应该与TBS没有关系，可能是内参失效了！否则应该结果全无！tjsb 战友：脱脂奶粉5％ 用TBS配，PH值为7.6 ，用试纸调，宁偏酸勿偏碱！不然会影响蛋白活性！我测了以前的TBS，ph接近8.0，和未调PH前差不多！
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laogulaogu edited on
其实内参并没有失效啊，因为又用同样的标本再做另一个指标时就做出来内参条带了，可是这个是无论如何也出不来，真是见鬼了！
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我今天洗片子也是空白一片，把我郁闷得，明天准备再战。
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我最近也做不出咯阿。。我也要试试重新配液，忽然又有信心了，也许我重新配过后也有改变呢，嘻嘻。
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hanhandyx我的实验现在也出现了类似的结果，50KD 的目的蛋白做出来的条带很好，可是内参β-actin却怎麽也做不出来，我用得是***的内参，HRP标记好的，所以跟二抗一起加入，以前做的几个指标都没有问题啊，现在怎么突然做不出来内参了，怎么回事呢？真怕是内参失效了呢！会不会也是这个TBS液PH值的原因呢？可我以前从未调过TBS液的PH值的呀！
还有一点，我的一抗、二抗通常是用TBST液配的5％的脱脂奶粉稀释的，那我现在是该调整TBST液的PH值呢还是改用TBS液配5%的脱脂奶粉呢？这个PH值具体要调到多少呢？请诸位高手赐教！
我的TBST液配方是：Tris-Hcl(PH8.0)10ml,
0.25ml您好，我也遇到了类似的问题，目的蛋白条带很好，内参一直出不来，只有淡淡的一条带，增大蛋白上样量也不管用，请问您最后是如何改善的？谢谢
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关于丁香园【拍立得】求助！！！遮光板出不来机子乱叫，胶片盒也拿不出_拍立得吧_百度贴吧
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【拍立得】求助！！！遮光板出不来机子乱叫，胶片盒也拿不出收藏
去年二手买的彩色相纸，刚用，开机遮光板出不来，机子还发出很刺耳的声音，想换一盒相纸，胶片盒也拿不出了，求助该怎么办！！
你这盒相纸拍的时候能出来吗？
你這是卡紙了，你就這麼打開裡面相紙很可能全部曝光了...我一般都是關在房間裡躲在被窩裡打開後蓋慢慢把相紙盒子弄出來，把卡住的兩三張抽出來，再拍拍就好了。
你的趣奇俏似乎没电了，取出后看看电池吧，不然下次依然会卡住。。。
登录百度帐号推荐应用& 求助，朱雀翼怎么拿？？
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我是属于那种不喜欢用修改器的人！ 刚才打了7，8遍，总算拿到了蓬莱玉枝，差点没吐血... 还差最后一样素材，朱雀翼，但是我前几天老打不出，说是要断桥迅速完成，之后迅速击破甘宁和张辽，那大概得在多少时间内呢？？望高手指教！
UID2548411主题阅读权限30帖子精华0积分456金钱4003 荣誉2 人气0 在线时间643 小时评议0
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攻略上说10分钟断桥成功，但尽量7分钟内完成
UID2304632主题阅读权限20帖子精华0积分11金钱111 荣誉0 人气0 在线时间3 小时评议0
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我觉得朱雀翼很好打啊，上来直接冲上路推了凌统+两大众脸，等工作兵长出来一路护送，把桥上兵清了，兵长在桥上待半分钟左右后断桥，剁了甘宁、张辽，OK······
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