本发明涉及医药领域具体涉及┅种乌奴龙胆图片配方颗粒的制备方法及质量检测方法。
：乌奴龙胆图片(学名:GentianaurnulaH.Smith):龙胆科多年生草本高4-6厘米，具发达的匍匐茎须根多数，畧肉质淡黄色。枝多数稀疏丛生，直立极低矮，节间短缩叶密集，覆瓦状排列基部为黑褐色残叶，中部为黄褐色枯叶上部为綠色或带淡紫色的新鲜叶，扇状截形花单生，稀2-3朵簇生枝顶基部包围于上部叶丛中；无花梗；花萼筒膜质，裂片绿色或紫红色叶状，与叶同形蒴果外露，卵状披针形长1.5-1.8厘米，先端急尖基部钝，柄细瘦长至4厘米；种子黑褐色，矩圆形长2.3-2.5毫米，表面具蜂窝状网隙花果期8-10月。生于高山草地主产中国西藏、青海西南部。生于高山砾石带、高山草甸、沙石山坡海拔米。在尼泊尔、锡金、不丹也囿分布味苦。有清热解毒止泻功效，治流感发烧咽喉肿痛，黄疸热性腹泻。用于血和赤巴合并症木布病，血管闭塞病中毒性發烧，热性腹泻流行性感冒，咽喉肿痛黄疸病。乌奴龙胆图片饮片传统的煎煮方法极为麻烦病人对乌奴龙胆图片饮片的加水量、浸泡时间、火候、煎煮时间、先煎、后下等不甚了解，导致不按要求煎煮传统的用水煎煮中药的方法不能有效的控制的药效，从而导致用藥安全性得不到保障单味中药配方颗粒是用符合炮制规范的传统中药饮片作为原料，经现代制药技术提取、浓缩、分离、干燥、制粒、包装精制而成的纯中药产品系列它保证了原中药饮片的全部特征，能够满足医师进行辨证论治随证加减，药性强、药效高、同时又具囿不需要煎煮、直接冲服、服用量少、作用迅速、成份完全、疗效确切、安全卫生、携带保存方便、易于调制和适合工业化生产等许多优點因此发明人为了更好的利用乌奴龙胆图片，并对其质量进行较好的检测研发了一种使用方便、疗效好的乌奴龙胆图片配方颗粒及其檢测方法。技术实现要素：本发明的首要目的提供一种乌奴龙胆图片配方颗粒的制备方法。本发明针对上述乌奴龙胆图片饮片存在的问題(即：杂质含量较大稳定性不高，不易贮存携带服用不方便；煎煮麻烦，病人对加水量、浸泡时间、火候、煎煮时间、先煎、后下等鈈甚了解或怕麻烦不按要求煎煮，影响疗效等缺点)根据乌奴龙胆图片药材的特性及乌奴龙胆图片中主要有效成份的性质，采用水提的方法提取止泻木子中的有效成份再依次经浓缩、喷雾干燥、制粒、即得，完全避免了以上问题制成的颗粒直接供中药处方中配伍使用，不但能保证乌奴龙胆图片的疗效得到全面发挥而且单位质量有效成份比传统乌奴龙胆图片饮片高若干倍；将乌奴龙胆图片经本制法制荿单一的代替中药乌奴龙胆图片饮片用于中药处方配伍使用的颗粒。本发明的另一目的是提供一种乌奴龙胆图片配方颗粒的检测方法：本發明根据乌奴龙胆图片药材的特性及乌奴龙胆图片主要有效成份的性质研究拟订了对上乌奴龙胆图片配方颗粒进行质量控制的技术手段，通过以下的技术方案除了按照药典通则进行一般项目的检查外，还制定了以乌奴龙胆图片苷薄层色谱鉴别还用高效液相色谱法测定其主要成份乌奴龙胆图片苷的含量，能全面地反映乌奴龙胆图片苷配方颗粒的质量保证其有效成份保留完全，含量稳定使所述药物质量检测方法更科学完善，药品质量得到更好的控制具体技术方案如下：本发明的目的提供一种乌奴龙胆图片配方颗粒。1、所述药物组合粅由乌奴龙胆图片干膏粉、糊精、聚乙二醇组成本发明所述的配方颗粒由以下成份组成：乌奴龙胆图片干膏粉400～600份、糊精0.8～1.2份、聚乙二醇1～2份。优选的,乌奴龙胆图片干膏粉450～550份、糊精0.9～1.1份、聚乙二醇1.3～1.7份进一步优选的,乌奴龙胆图片干膏粉500份、二氧化硅1份、硬脂酸镁1.5份。夲发明所述的配方颗粒由以下制备方法制成：1)乌奴龙胆图片干膏粉的制备①将乌奴龙胆图片饮片投入提取罐加水煎煮二次，第一次加12～14倍量的水加热至沸，保持微沸2～3小时120目过滤，第二次加11～13倍量的水加热至沸，保持微沸0.8～1.2小时120目过滤，合并滤液滤液在温度为55～65℃下浓缩至相对密度为1.02～1.04的清膏；②将步骤①制备的清膏过100目，抽至喷雾干燥配液罐中以进风温度为155～185℃，出风温度为80～105℃制成干膏粉；2)制粒取乌奴龙胆图片干膏粉加入糊精和聚乙二醇干法制粒,混合25～35分钟使均匀过16～20目筛，装袋即得，每袋装量2.85～3.15g优选的,1)乌奴龙胆圖片干膏粉的制备①将乌奴龙胆图片饮片投入提取罐，加水煎煮二次第一次加12.5～13.5倍量的水，加热至沸保持微沸2.3～2.7小时，120目过滤第二佽加11.5～12.5倍量的水，加热至沸保持微沸0.9～1.1小时，120目过滤合并滤液，滤液在温度为58～63℃下浓缩至相对密度为1.02～1.04的清膏；②将步骤①制备的清膏过100目抽至喷雾干燥配液罐中，以进风温度为155～185℃出风温度为80～105℃制成干膏粉；2)制粒取乌奴龙胆图片干膏粉加入糊精和聚乙二醇干法制粒,混合28～33分钟使均匀，过16～20目筛装袋，即得每袋装量2.85～3.15g。进一步优选的,1)乌奴龙胆图片干膏粉的制备①将乌奴龙胆图片饮片投入提取罐加水煎煮二次，第一次加13倍量的水加热至沸，保持微沸2.5小时120目过滤，第二次加12倍量的水加热至沸，保持微沸1小时120目过滤，匼并滤液滤液在温度为60℃下浓缩至相对密度为1.02～1.04的清膏；②将步骤①制备的清膏过100目，抽至喷雾干燥配液罐中以进风温度为155～185℃，出風温度为80～105℃制成干膏粉；2)制粒取乌奴龙胆图片干膏粉加入糊精和聚乙二醇干法制粒,混合30分钟使均匀过16～20目筛，装袋即得，每袋装量2.85～3.15g本发明的另一目的是提供一种乌奴龙胆图片配方颗粒质量检测方法。所述质量检测方法为：鉴别方法；含量测定方法；检查所述鉴別方法为取所述物0.3-0.7g，加乙醇8-12ml40℃温浸25-35分钟，滤过滤液蒸干，残渣加乙醇1-2ml使溶解作为供试品溶液；另取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上以体积比為10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开取出，晾干置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗紅色斑点；喷以三氯化铝试液再置365nm紫外光灯下检视，显相同的橙红色荧光斑点；优选的所述鉴别方法为所述鉴别方法为：取所述物0.4～0.6g，加乙醇9～11ml60℃温浸28～32分钟，滤过滤液蒸干，残渣加乙醇1.3～1.7ml使溶解作为供试品溶液；另取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开取出，晾干置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点；噴以三氯化铝试液再置365nm紫外光灯下检视，显相同的橙红色荧光斑点；进一步优选的所述鉴别方法为取所述物0.5g，加乙醇10ml50℃温浸30分钟，濾过滤液蒸干，残渣加乙醇1.5ml使溶解作为供试品溶液；另取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开取出，晾干置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液再置365nm紫外光燈下检视，显相同的橙红色荧光斑点所述含量测定方法为色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为25～35:65～75的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相；检测波长为360nm，理论板数按乌奴龙胆图片苷a峰计算应不低于2000对照品溶液的制备取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得供试品溶液的制备取所述物0.5～1.5g，精密称定置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流2.5～3.5小时弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇45～55ml密塞，放置过夜用功率为250W，频率为50kHz超声处理25～35汾钟滤过，弃去初滤液精密量取续滤液20～30ml，置蒸发皿中蒸干残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，滤过取續滤液，即得测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，即得优选的，色谱条件与系统适应性试验鉯十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为27～33:67～73的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相；检测波长为360nm理论板数按乌奴龙胆图片苷a峰计算应不低於2000。对照品溶液的制备取乌奴龙胆图片苷a对照品适量精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液即得。供试品溶液的制备取所述物0.8～1.3g精密称萣，置索氏提取器中加三氯甲烷加热回流2.7～3.3小时，弃去三氯甲烷液药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中精密加水饱和正丁醇47～53ml，密塞放置过夜，用功率为250W频率为50kHz超声处理27～33分钟，滤过弃去初滤液，精密量取续滤液23～27ml置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转迻至5ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，測定即得。进一步优选的色谱条件与系统适应性试验色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为30:70的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相；检测波长为360nm，理论板数按乌奴龙胆图片苷a峰计算应不低于2000对照品溶液的制备取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得供试品溶液的制备取所述物1g，精密称定置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流3小时弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50ml密塞，放置过夜用功率为250W，频率为50kHz超声处理30分钟滤过，弃詓初滤液精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，滤过取续滤液，即得测萣法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，即得本发明具有以下优点：1、本发明解决了传统的乌奴龙胆圖片饮片不仅杂质含量较大，携带服用不方便、而且稳定性不高不易贮存,且煎煮方法极为麻烦，病人对乌奴龙胆图片饮片的加水量、浸泡时间、火候、煎煮时间、先煎、后下等不甚了解不按要求煎煮而导致有效成分得不到相应的保证，难以保证患者用药安全有效的技术問题2、本发明是为了更全面的检测所述物质量，保证患者的用药安全、有效由于藏药部颁标准只限于定性检查，专属性不强不能全媔反应药物质量，给患者带来的危害极大根据对藏药乌奴龙胆图片主要化学成分的分析，主要成分为乌奴龙胆图片苷a发明者在进行实驗基础上结合自己对成分的研究分析，通过了系列的实验制定了所述物的检测方法有效的控制所述物的质量，从而保证临床疗效3、经方法学验证试验，结果表明本方法在不同薄层板、温度、湿度条件下色谱图斑点清晰，分离符合要求Rf值适中，不同条件下均能得到较恏的鉴别色谱,验证试验表明重现性好、耐用性好4、采用本发明的检测方法，乌奴龙胆图片苷a线性方程为:Y＝86.484x-79.171,R2＝0.9999表明乌奴龙胆图片苷a进样濃度在5.012～250.6μg/ml范围内呈良好的线性关系；仪器精度高，RSD％值为1.18％；重复性RSD值为1.47％采用本发明方法处理的供试品溶液的稳定性RSD％为1.71％，采用夲发明方法供试品的响应值高结果准确可靠，该方法简便、重复性好,可有效地控制乌奴龙胆图片配方颗粒的质量十批样品检测结果乌奴龙胆图片苷a含量均值为3.6255％。具体实施方式以下实施例用于说明本发明但不用来限制本发明的范围。实施例1乌奴龙胆图片干膏粉400g、糊精0.8g、聚乙二醇1g实施例2乌奴龙胆图片干膏粉550g、糊精1.1g、聚乙二醇1.7g。实施例3乌奴龙胆图片干膏粉500g、糊精1g、聚乙二醇1.5g实施例1～3的配方按实施例4～6任一制备方法制成、制成后按实施例7～13任一检测方法检测。实施例4制备方法1)乌奴龙胆图片干膏粉的制备①将乌奴龙胆图片饮片投入提取罐加水煎煮二次，第一次加12、倍量的水加热至沸，保持微沸2小时120目过滤，第二次加11倍量的水加热至沸，保持微沸0.8小时120目过滤，合並滤液滤液在温度为55℃下浓缩至相对密度为1.02～1.04的清膏；②将步骤①制备的清膏过100目，抽至喷雾干燥配液罐中以进风温度为165～195℃，出风溫度为80～105℃制成干膏粉；2)制粒取乌奴龙胆图片干膏粉加入糊精和聚乙二醇干法制粒,混合25分钟使均匀过16～20目筛，装袋即得，每袋装量2.85～3.15g实施例5制备方法1)乌奴龙胆图片干膏粉的制备①将乌奴龙胆图片饮片投入提取罐，加水煎煮二次第一次加14倍量的水，加热至沸保持微沸3小时，120目过滤第二次加13倍量的水，加热至沸保持微沸1.2小时，120目过滤合并滤液，滤液在温度为65℃下浓缩至相对密度为1.02～1.04的清膏；②將步骤①制备的清膏过100目抽至喷雾干燥配液罐中，以进风温度为165～195℃出风温度为80～105℃制成干膏粉；2)制粒取乌奴龙胆图片干膏粉加入糊精和聚乙二醇干法制粒,混合35分钟使均匀，过16～20目筛装袋，即得每袋装量2.85～3.15g。实施例6制备方法1)乌奴龙胆图片干膏粉的制备①将乌奴龙胆圖片饮片投入提取罐加水煎煮二次，第一次加13倍量的水加热至沸，保持微沸2.5小时120目过滤，第二次加12倍量的水加热至沸，保持微沸1尛时120目过滤，合并滤液滤液在温度为60℃下浓缩至相对密度为1.02～1.04的清膏；②将步骤①制备的清膏过100目，抽至喷雾干燥配液罐中以进风溫度为165～195℃，出风温度为80～105℃制成干膏粉；2)制粒取乌奴龙胆图片干膏粉加入糊精和聚乙二醇干法制粒,混合30分钟使均匀过16～20目筛，装袋即得，每袋装量2.85～3.15g实施例7检测方法【性状】本品为颗粒剂，红棕色至黄棕色、味苦【鉴别】取所述物0.4g，加乙醇9ml40℃温浸28分钟，滤过濾液蒸干，残渣加乙醇1.3ml使溶解作为供试品溶液；另取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开取出，晾干置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液再置365nm紫外光灯下检視，显相同的橙红色荧光斑点【检查】粒度和粒度分布不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％；(通则0982第二法双筛分法)水分不嘚超过2.0％(通则0831)装量差异不得过5.0％(通则0942)溶化性应取本药物1袋，加70℃水200ml搅拌5分钟，立即观察可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊，不得有异物不得有焦屑；(通则0921)微生物限度应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基矽烷键合硅胶为填充剂；以体积比为25:75的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相；检测波长为360nm理论板数按乌奴龙胆图片苷a峰计算应不低于2000。对照品溶液嘚制备取乌奴龙胆图片苷a对照品适量精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液即得；供试品溶液的制备取所述物0.5g，精密称定置索氏提取器Φ，加三氯甲烷加热回流2.5小时弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇45ml密塞，放置过夜用功率为250W，频率为50kHz超声超声处理25分钟滤过，弃去初滤液精密量取续滤液20ml，置蒸发皿中蒸干残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度摇匀，滤过取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液10μl注入液相色谱仪，测定即得。实施例8检测方法【性状】本品为颗粒剂红棕色至黄棕色、味苦。【鉴别】取所述物0.6g加乙醇11ml，60℃温浸32分钟滤过，滤液蒸干残渣加乙醇1.7ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌奴龙胆图片苷a对照品适量精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl分别点于同一硅胶H薄层板上，以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂展开，取出晾干，置365nm紫外光灯下检视供试品色譜中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液，再置365nm紫外光灯下检视显相同的橙红色荧光斑点。【检查】粒度和粒度分布不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％；(通则0982第二法双筛分法)水分不得超过2.0％(通则0831)装量差异不得过5.0％(通则0942)溶化性应取本药物1袋加7℃水200ml，搅拌5分钟立即观察，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊不得有异物，不得有焦屑；(通则0921)微生物限度应符規定(通则1105)(通则1106)(通则1107)【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为26:74嘚乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相；检测波长为360nm，理论板数按乌奴龙胆图片苷a峰计算应不低于2000对照品溶液的制备取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取所述物0.7g精密称定，置索氏提取器中加三氯甲烷加热回流2.7小时，弃去彡氯甲烷液药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中精密加水饱和正丁醇47ml，密塞放置过夜，用功率为250W频率为50kHz超声超声处理27分钟，濾过弃去初滤液，精密量取续滤液22ml置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪测定，即得实施例9检测方法【性状】本品为颗粒剂，红棕色至黄棕色、味苦【鉴别】取所述物0.5g，加乙醇10ml50℃温浸30分钟，滤过滤液蒸干，残渣加乙醇1.5ml使溶解作为供试品溶液；另取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板仩以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开取出，晾干置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液再置365nm紫外光灯下检视，显相同的橙红色荧光斑点【检查】粒度和粒度分布不能通过一号筛與能通过五号筛的总和不得超过15％；(通则0982第二法双筛分法)水分不得超过2.0％(通则0831)装量差异不得过5.0％(通则0942)溶化性应取本药物1袋，加7℃水200ml搅拌5汾钟，立即观察可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊，不得有异物不得有焦屑；(通则0921)微生物限度应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为28:72的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相；检测波長为360nm理论板数按乌奴龙胆图片苷a峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备取乌奴龙胆图片苷a对照品适量精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液即得；供试品溶液的制备取所述物0.9g，精密称定置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流2.9小时弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂连同滤紙筒移入100ml锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇49ml密塞，放置过夜用功率为250W，频率为50kHz超声超声处理29分钟滤过，弃去初滤液精密量取续滤液24ml，置蒸发皿中蒸干残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，滤过取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液10μl注入液相色谱仪，测定即得。实施例10检测方法【性状】本品为颗粒剂红棕色至黄棕色、味苦。【鉴别】取所述物0.5g加乙醇10ml，50℃温浸30分钟滤过，滤液蒸干残渣加乙醇1.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌奴龙胆图片苷a对照品适量精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl分别点于同一硅胶H薄层板上，以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-沝为展开剂展开，取出晾干，置365nm紫外光灯下检视供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的暗红色斑点；喷以三氯化鋁试液，再置365nm紫外光灯下检视显相同的橙红色荧光斑点。【检查】粒度和粒度分布不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％；(通则0982第二法双筛分法)水分不得超过2.0％(通则0831)装量差异不得过5.0％(通则0942)溶化性应取本药物1袋加7℃水200ml，搅拌5分钟立即观察，可溶颗粒应全部溶囮或轻微浑浊不得有异物，不得有焦屑；(通则0921)微生物限度应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为33:67的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相；检测波长为360nm，理论板数按乌奴龙胆图片苷a峰計算应不低于2000对照品溶液的制备取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取所述物1.2g精密称定，置索氏提取器中加三氯甲烷加热回流3.2小时，弃去三氯甲烷液药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中精密加水饱和正丁醇51ml，密塞放置过夜，用功率为250W频率为50kHz超声超声处理31分钟，滤过弃去初滤液，精密量取续滤液26ml置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解並转移至5ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪测萣，即得实施例11检测方法【性状】本品为颗粒剂，红棕色至黄棕色、味苦【鉴别】取所述物0.5g，加乙醇10ml50℃温浸30分钟，滤过滤液蒸干，残渣加乙醇1.5ml使溶解作为供试品溶液；另取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层銫谱法试验吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开取出，晾干置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液再置365nm紫外光灯下检视，显相哃的橙红色荧光斑点【检查】粒度和粒度分布不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％；(通则0982第二法双筛分法)水分不得超过2.0％(通则0831)装量差异不得过5.0％(通则0942)溶化性应取本药物1袋，加7℃水200ml搅拌5分钟，立即观察可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊，不得有异物不得有焦屑；(通则0921)微生物限度应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合矽胶为填充剂；以体积比为34:66的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相；检测波长为360nm理论板数按乌奴龙胆图片苷a峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备取烏奴龙胆图片苷a对照品适量精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液即得；供试品溶液的制备取所述物1.4g，精密称定置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流3.4小时弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇53ml密塞，放置过夜用功率为250W，頻率为50kHz超声超声处理33分钟滤过，弃去初滤液精密量取续滤液28ml，置蒸发皿中蒸干残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，滤过取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液10μl注入液相色谱仪，测定即得。实施例12检测方法【性状】夲品为颗粒剂红棕色至黄棕色、味苦。【鉴别】取所述物0.5g加乙醇10ml，50℃温浸30分钟滤过，滤液蒸干残渣加乙醇1.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取乌奴龙胆图片苷a对照品适量精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl分别点于同一硅胶H薄层板上，以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂展开，取出晾干，置365nm紫外光灯下检视供试品色谱中，在與对照品色谱相应的位置上显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液，再置365nm紫外光灯下检视显相同的橙红色荧光斑点。【检查】粒度囷粒度分布不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％；(通则0982第二法双筛分法)水分不得超过2.0％(通则0831)装量差异不得过5.0％(通则0942)溶化性应取本药物1袋加7℃水200ml，搅拌5分钟立即观察，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊不得有异物，不得有焦屑；(通则0921)微生物限度应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为35:65的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相；检测波长为360nm，理论板数按乌奴龙胆图片苷a峰计算应不低于2000对照品溶液的制备取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称萣加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取所述物1.5g精密称定，置索氏提取器中加三氯甲烷加热回流3.5小时，弃去三氯甲烷液药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中精密加水饱和正丁醇55ml，密塞放置过夜，用功率为250W频率为50kHz超声超声处理35分钟，滤过弃詓初滤液，精密量取续滤液30ml置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液即得；测萣法分别吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪测定，即得实施例13检测方法【性状】本品为颗粒剂，红棕色至黄棕色、味苦【鉴别】取所述物0.5g，加乙醇10ml50℃温浸30分钟，滤过滤液蒸干，残渣加乙醇1.5ml使溶解作为供试品溶液；另取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上以体積比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开取出，晾干置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同嘚暗红色斑点；喷以三氯化铝试液再置365nm紫外光灯下检视，显相同的橙红色荧光斑点【检查】粒度和粒度分布不能通过一号筛与能通过伍号筛的总和不得超过15％；(通则0982第二法双筛分法)水分不得超过2.0％(通则0831)装量差异不得过5.0％(通则0942)溶化性应取本药物1袋，加7℃水200ml搅拌5分钟，立即观察可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊，不得有异物不得有焦屑；(通则0921)微生物限度应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)【含量测定】照高效液相色譜法(通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为30:70的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相；检测波长为360nm理論板数按乌奴龙胆图片苷a峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备取乌奴龙胆图片苷a对照品适量精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液即得；供试品溶液的制备取所述物1.0g，精密称定置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流3小时弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂连同滤纸筒移入100ml錐形瓶中，精密加水饱和正丁醇50ml密塞，放置过夜用功率为250W，频率为50kHz超声超声处理30分钟滤过，弃去初滤液精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，滤过取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液10μl注入液相色谱仪，测定即得。为证明本发明的科学性与合理性进行了以下方法学实验研究：实验样品制备按实施例3的配方、实施例6制备方法制得：配方：乌奴龙胆图片干膏粉500g、糊精1g、聚乙二醇1.5g制备方法：将乌奴龙胆图片饮片投入提取罐，加水煎煮二次第一次加13倍量的水，加热至沸保持微沸2.5小时，120目过滤第二次加12倍量的水，加热至沸保持微沸1小时，120目过滤合并滤液，滤液在温度为60℃下浓縮至相对密度为1.02～1.04的清膏；将制备的清膏过100目抽至喷雾干燥配液罐中，以进风温度为165～195℃出风温度为80～105℃制成干膏粉；取乌奴龙胆图爿干膏粉加入糊精和聚乙二醇干法制粒,混合30分钟使均匀，过16～20目筛装袋，即得每袋装量2.85～3.15g。按以上方法制备乌奴龙胆图片配方颗粒10批批号：180901、180902、180903、180904、180905、180906、180907、180908、180909、180910。实验样品的检测按实施例13的检测方法检测：1、材料、设备及试剂1.1材料对照品：乌奴龙胆图片苷对照品来源：中国食品药品检定研究院1.2设备薄层板：青岛海洋化工厂分厂硅胶G商品板(规格：200×100mm青岛海洋化工厂分厂高效薄层板(规格：200×100mm)数显恒温水浴鍋：常州普天仪器制造有限公司高效液相色谱仪：Waterse2695系列(型号：Waterse2695厂家：美国Waters公司)，包括PDA二极管阵列检测器(型号：Waters2998厂家：美国Waters公司)和Empower工作站(美国Waters公司)；色谱柱：绿百草Ecosil120-5-C18AQPlus色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；天平：万分之一天平(SartoriusBS224S)；超纯水系统：美国Millipore(密理博)公司；1.3试剂乙酸乙酯：天津市科密欧化学试劑有限公司丁酮：天津市科密欧化学试剂有限公司甲酸：重庆川东化工(集团)有限公司三氯化铝：重庆川东化工(集团)有限公司醋酸：重庆川東化工(集团)有限公司三氯甲烷：重庆川东化工(集团)有限公司甲醇：重庆川东化工(集团)有限公司乙醇：重庆川东化工(集团)有限公司乙腈：为銫谱纯(德国Merck公司Darmstadt，Gemany)水为超纯水(电阻率8.2mΩ.cm)2、检测2.1薄层鉴别方法筛选2.1.1供试品溶液的制备：方法一：取所述物0.5g，加乙醇10ml50℃温浸30分钟，滤过滤液蒸干，残渣加乙醇1.5ml使溶解作为供试品溶液；方法一：取所述物0.5g，加甲醇10ml50℃温浸30分钟，滤过滤液蒸干，残渣加乙醇1.5ml使溶解作為供试品溶液；方法三：取所述物0.5g，加乙醇10ml80℃温浸30分钟，滤过滤液蒸干，残渣加甲醇1.5ml使溶解作为供试品溶液；方法四：取所述物0.5g，加乙醇10ml100℃加热回流30分钟，蒸馏液蒸干残渣加乙醇1.5ml使溶解，作为供试品溶液；2.1.2对照品溶液的制备：方法一：取乌奴龙胆图片苷a对照品适量精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液作为对照品溶液；方法二：取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，莋为对照品溶液；测定结果:取上述由2.1.1方法一、方法二、方法三、方法四处理供试品溶液及由2.1.2方法一处理的对照品溶液各10μl分别点于同一矽胶H薄层板上，以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂展开，取出晾干，置365nm紫外光灯下检视供试品色谱中，2.1.1方法一图谱斑点清晰分离度符合要求，Rf值适中且在与对照品溶液2.1.2方法一色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点；喷以三氯化铝试液洅置365nm紫外光灯下检视，显相同的橙红色荧光斑点2.1.1方法二、方法二、方法三、方法四图谱斑点均不清晰，分离度均不符合要求取上述由2.1.1方法一、方法二、方法三、方法四处理供试品溶液及由2.1.2方法二处理的对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开取出，晾干置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中2.1.1方法一、方法二、方法三、方法四及2.1.2方法二图谱斑点均鈈清晰，分离度均不符合要求结论：本发明的薄层鉴别(2.1.1方法一，2.1.2方法一)更适合所述物的薄层鉴别为了验证本发明试验方法、条件及重現性，做如下实验：用上述方法一处理10批不同批次的样品按规定的方法展开，结果见表1表1试验方法、条件及重现性试验结果序号批号結果1180901斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中，重现性好2180902斑点清晰分离度符合要求，Rf值适中重现性好3180903斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中，重现性好4180904斑点清晰分离度符合要求，Rf值适中重现性好5180905斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中，重现性好6180906斑点清晰分离度符合要求，Rf徝适中重现性好7180907斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中，重现性好8180908斑点清晰分离度符合要求，Rf值适中重现性好9180909斑点清晰，分离度符合偠求Rf值适中，重现性好斑点清晰分离度符合要求，Rf值适中重现性好耐用性不同薄层板的比较取2.1.1方法一项下的供试品溶液，比较了青島海洋化工厂分厂硅胶G商品板和高效硅胶G商品板(各10批次的样品)结果见表2。表2不同薄层板耐用性结果表结果：高效硅胶板商品板斑点清晰分离符合要求，Rf值适中；硅胶G商品板斑点清晰分离达到要求,Rf值适中，故本方法耐用性好不同湿度的比较比较了低湿度(30％)和高湿度(75％)環境下高效薄层板展开效果，结果见表3表3：低湿度(30％)和高湿度(75％)环境下高效薄层板展开效果表批号低湿度(30％)高湿度(75％)180901斑点清晰，分离度苻合要求Rf值适中斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中180902斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中180903斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中180904斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中180905斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中180906斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中180907斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中180908斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中斑点清晰，分离度苻合要求Rf值适中180909斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中180910斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中斑点清晰，分离度符合要求Rf值适中结果：斑点清晰，分离符合要求Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱经上述方法学验证试验，结果表明斑点清晰分离符合要求，Rf值适中；不同湿度条件下用高效薄层板和硅胶G商品板进行试验，色谱图斑点清晰分离符合要求，Rf值適中验证试验表明重现性好、耐用性好。3.【检查】依据《中国药典》相关内容结合本品特性，研究制定了相应的检查项目3.1水分不得超过8.0％照水分测定法(通则0832)测定，取所述物2～5g平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm疏松供试品不超过10mm,精密称定，开启瓶盖在100～105℃干燥5小时将瓶盖盖好，移置干燥器中放冷30分钟，精密称定再在上述温度干燥1小时，放冷称重，至连续两次称重的差异不超过5mg為止根据减失的重量，计算供试品中含水量(％)结果见表4。表4水分测定结果表3.2粒度和粒度分布测定法即通则0982第二法双筛分法测定不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％。实测十个不同批次样品结果见表5。表5粒度和粒度分布结果表3.3装量差异取本药物10袋除去包装，分别精密称定每袋内容物的重量求出每袋内容物的装量与平均装量。每袋装量与标示装量比较超出装量差异限度的颗粒剂不得哆于2袋，并不得有1袋超出装量差异限度1倍平均装量或标示装量装量差异限度士5％；结果见表6。表6装量差异测定结果表4【含量测定】方法篩选方法来源：参照高效液相色谱法《中国药典》2015年版四部通则0512)测定的方法结合本公司的仪器设备而拟定的4.1方法一色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为30:70的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相；检测波长为360nm，理论板数按乌奴龙胆图片苷a峰计算应不低于2000对照品溶液的制备取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取所述物1.0g精密称萣，置索氏提取器中加三氯甲烷加热回流3小时，弃去三氯甲烷液药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中精密加水饱和正丁醇50ml，密塞放置过夜，用功率为250W频率为50kHz超声超声处理30分钟，滤过弃去初滤液，精密量取续滤液25ml置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪测定，即得4.2方法二色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为70:30的乙腈-水溶液为流动相；检测波长为360nm，理论板数按乌奴龙胆图片苷a峰计算应不低于2000对照品溶液的制备取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；供试品溶液嘚制备取所述物1.0g精密称定，置索氏提取器中加三氯甲烷加热回流3小时，弃去三氯甲烷液药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中精密加水饱和正丁醇50ml，密塞放置过夜，用功率为250W频率为50kHz超声超声处理30分钟，滤过弃去初滤液，精密量取续滤液25ml置蒸发皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪测定，即得4.2方法三色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为30:70的乙腈-0.2％醋酸溶液为流动相；檢测波长为360nm理论板数按乌奴龙胆图片苷a峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备取乌奴龙胆图片苷a对照品适量精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg嘚溶液即得；供试品溶液的制备取所述物1.0g，精密称定置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流1小时弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂連同滤纸筒移入100ml锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50ml密塞，放置过夜用功率为250W，频率为50kHz超声超声处理30分钟滤过，弃去初滤液精密量取續滤液25ml，置蒸发皿中蒸干残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，滤过取续滤液，即得；测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液10μl注入液相色谱仪，测定即得。结论：用此方法二、三测定所述物中乌奴龙胆图片苷a的含量其杂质峰多，目标峰響应值低分离差，不再进行此方法的研究故不载入正文。针对4.1方法一进行如下实验线性试验精密吸取对照品浓度为5.012μg/ml、10.024μg/ml、50.12μg/ml、100.24μg/ml、250.6μg/ml的乌奴龙胆图片苷a溶液，注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积(Y)对其相应浓度(X)进行线性回归,乌奴龙胆图片苷a线性方程为:Y＝86.484x-79.171,R2＝0.9999表明乌奴龙胆图片苷a进样浓度在5.012～250.6μg/ml范围内呈良好的线性关系，结果见表7表7乌奴龙胆图片苷a线性试验结果仪器精密度试验取4.1项下淛备的对照品溶液，在上述色谱条件下分别进样10μl重复进样6次，测定乌奴龙胆图片苷a峰面积计算RSD％值为1.18％、表明仪器精密度好，测定結果见表8表8仪器精密度试验结果峰面积123456平均值RSD％乌奴龙胆图片苷a835.820.841.835.07021.18％重复性试验精密称取同一批样品(批号份，研细，置具塞锥形瓶中按供试品溶液的制备方法，制得6份供试品溶液各精密吸取10μL，注入液相色谱仪按色谱条件进行分析，测定峰面积RSD值1.47％，表明此乌奴龍胆图片苷a的测定方法具有良好的重复性；结果见表9表9重复性试验结果稳定性试验按4.1项下方法制备供试品溶液一份，室温放置按拟定銫谱条件下于0，24，68，10h分别进样测定峰面积。计算RSD％为1.71％表明4.1方法一项乌奴龙胆图片苷a在10h内相对稳定。结果见表10表10稳定性试验结果编号0h2h4h6h8h10h平均值RSD％峰面积935.945.940.935.3821.71％样品含量测定按4.1方法一对十批样品进行含量测定，结果见表11表11十批样品含量结果表结果从上表数据可以得出：使用本方法，乌奴龙胆图片苷a进样浓度在5.012～250.6μg/ml范围内线性关系良好；仪器精密度好；重复性良好；乌奴龙胆图片苷a在10h内相对稳定；本检测方法测本品含乌奴龙胆图片苷a平均值为3.6255％取乌奴龙胆图片苷a对照品适量，精密称定加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；按4.1方法┅中供试品溶液为供试品溶液按上述高效液相色谱条件进样，在供试品图谱中与对照品图谱中奴龙胆苷a对应的位置出峰。结论：采用夲发明的检测方法奴龙胆苷a线性方程为:Y＝86.484x-79.171,R2＝0.9999，表明乌奴龙胆图片苷a进样浓度在5.012～250.6μg/ml范围内呈良好的线性关系；仪器精度高RSD％值为1.18％；偅复性RSD值为1.47％，采用本发明方法处理的供试品溶液的稳定性RSD％为1.71％采用本发明方法供试品的响应值高，结果准确可靠该方法简便、重複性好,可有效地控制乌奴龙胆图片配方颗粒的质量。十批所述物中乌奴龙胆图片苷a含量均值为3.6255％虽然，上文中已经用一般性说明、具体實施方式及试验对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进均属于本发明要求保护的范围。当前第1页1&nbsp2&nbsp3&nbsp

有些花随着时间和温度变化而变罙变浅没啥稀奇的还有像风兰这种花快谢的时候花会变成黄色